特别提示:包括平板涂布专用玻璃珠在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床YL及其他非科研用途!
产品名称:平板涂布专用玻璃珠
英文名称:Spread-plate Use Glass Beads
产品货号:GS0140
产品规格:25g
储存条件:常温(18-25℃)
概述
本品为平板涂布专用玻璃珠,直径为5mm,经过高压灭菌处理,适用于转化后细菌的涂布。涂布方法对转化效率有一定的影响,使用本产品代替传统的涂布棒进行涂布可以获得更多的转化子。
特点
- 使用方便,无需灭菌。一次性使用,防止交叉污染。涂布更均匀,可获得更多转化子。
应用
平板涂布
使用说明
往平板里加入6-8颗玻璃珠,加入菌液后无规律摇晃。
根据您的关注的
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名称:大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞
货号:BTN140378
规格:10*100μl
本产品来源于Stratagene公司的BL21-Gold菌株,缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶,从而减少对重组蛋白的降解,补充大肠杆菌缺乏的4 种稀有密码子(AGA、AUA、CCC、CUA)对应的tRNA(argU、ileY、proL、leuW),提高外源基因,尤其是富含AT-或GC-的真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3 区(DE3 区含有T7 噬菌体RNA聚合酶),可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达,同时具有四环素,氯霉素,链霉素,壮观霉素抗性。本产品由特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。
菌株基因型为:F- ompT hsdS(rB-mB-)dcm+ Tetr galλ(DE3)endA Hte [argU proLCamr] [argU ileY leuW Strep/Specr]。
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μl感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含有相应抗生素的LB 固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA 总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm ,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
4. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM 均可)。
5. 为获得需要量的蛋白,诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
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