Qubit4 核酸蛋白荧光定量仪

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艾本德：5424R高速冷冻离心机，艾本德移液器
梅特勒：ME204电子天平

新一代测序（NGS）实验中，我们需要将精确量的DNA文库分子上样到测序仪中。如果测序运行时的文库分子过多或过少，都会使数据质量受损。这不仅浪费宝贵的样本和试剂，也浪费我们和仪器的时间。对于芯片分析（Microarray）和实时定量PCR（qPCR）而言，精确测定样本中的DNA或RNA也是必需的。

以往我们大多采用分光光度计来测定260 nm处的吸光度，对DNA和RNA进行定量。尽管这种方法被广泛采用，但并不意味着它的读数是准确而可靠的。紫外吸光度测量不具有选择性，无法区分DNA、RNA或蛋白质。而一些游离核苷酸或多余的盐离子也会影响检测的数值。此外，紫外分光光度计的灵敏度不足，无法完成低浓度DNA和RNA的精确定量。

 

 DNA或RNA的选择性PK

研究人员曾经做过实验，使用DNA和RNA含量相同的样本，利用qubit® dsDNA BR 分析试剂盒测定其中DNA的浓度，结果发现测量结果在实际含量的的±2%范围内，足以证明qubit®的厉害。之后，他们使用了RNA含量比DNA高10倍的样本，发现测得的DNA浓度仅比实际值高7%。再来看看分光光度计的表现吧。研究人员发现它们无法准确测定上述样本中DNA和RNA的含量（图下图）。好吧，回合qubit® 获胜。

上图中，用qubit® dsDNA BR和qubit® RNA BR分析试剂盒及qubit®荧光计，按照试剂盒实验方案检测含有lamBDa DNA (10 ng/μL)和不同量的大肠杆菌核糖体RNA (0-100 ng/μL)的样本，每个样品重复3次。然后采用NanoDrop® ND-1000分光光度计检测同一样本三次，采用Perkinelmer® LamBDa 35分光光度计检测一次。标示的浓度是在qubit®分析管中稀释前起始样本的DNA和RNA浓度。红色和橙色趋势线分别表示起始样本中DNA和RNA的实际含量。

低浓度下的准确性PK

研究人员之后采用qubit® dsDNA HS分析试剂盒及qubit® 荧光计，定量浓度仅为10 pg/μL的样本中的DNA，发现测得值在实际值的±12%范围内。而采用分光光度计测量上述相同样本，测得的浓度比实际值高46倍。而对于10 ng/μL的样本，qubit® 测得值在实际值的±1%范围内，而分光光度计测定的浓度在实际值的±5%范围内（如图）。显然，在样本浓度低的情况下，使用qubit® 更为合适。

 

 

 

上图中. qubit® 荧光定量的准确度和精度。根据标准试剂盒实验方案，在qubit® 荧光计中采用qubit® dsDNA HS分析试剂盒重复10次测量浓度在0.01至10 ng/μL之间的lamBDa DNA。同时采用NanoDrop® ND-1000分光光度计重复10次测量相同浓度的DNA，比较结果的准确度(A) 和精度(B)。

样本浓度范围PK

 

 qubit 的配套试剂盒有很多种，分别适合dsDNA、ssDNA、RNA、microRNA和蛋白质。其中，双链DNA分析试剂盒又分为高灵敏度（HS）和宽范围（BR）两种，适合10 pg/μL至1 μg/μL的DNA。与之类似，qubit RNA HS和BR分析试剂盒覆盖的样本浓度范围在250 pg/μL至1 μg/μL。而分光光度计的检测范围通常在2 ng//μL至15 μg/μL（如图）。由此可见，qubit 适合的浓度范围更宽，不过，高浓度样本在分光光度计上测定就不必稀释。 

 

 

上图中. qubit®分析与采用NanoDrop®分光光度计进行紫外吸光度检测的样本浓度范围比较。

 

其他方面PK

 

当然，分光光度计也有它的优势。全光谱吸光度读数可以通过吸收峰显示是否有污染物存在。另外，它的使用成本较低，上样、测定、擦拭即可，几乎不需要消耗品。而qubit® 则需要购买配套的分析试剂盒。

想必大家还对代的qubit® 荧光定量仪记忆犹新，活脱脱一个复活节的彩蛋嘛。如今，qubit® 已经升级到3.0的版本，虽然没有之前那么萌，但易用程度再次升级。5.7英寸的彩色触摸屏方便设置和使用，更有多种操作语言供你灵活选择。全新的荧光计模式，使得您可以获得每个样本的原始荧光数据（RFU），配合Myqubit在线工具可以创建新的分析类型，不断扩展您的应用范围。qubit® 3.0荧光定量仪采用强大的双核处理器，5秒内快速准确地定量DNA、RNA和蛋白。大尺寸的彩色触摸屏和Android系统，使得操作非常简单直观。浓度计算和设置都由仪器自动完成。若样本浓度处于延伸范围或超出范围，屏幕上均会有图形显示。

测量工作也很简单，所有qubit® 试剂盒均采用相同的操作方案，只是孵育和读数稍有差异。其中DNA和RNA分析试剂盒仅需孵育2分钟，而蛋白分析试剂盒需要15分钟。1-20 μL样本均可使用。qubit® 可储存1000个样本结果，您可以通过U盘导出，也可以使用USB连接线直接与电脑相连。

 

如今，Life Technologies提供单台qubit® 荧光定量仪、起始套装（包括四种分析试剂盒）以及NGS起始套装，供您选择。
性能描述：创新性的Invitrogen™ Qubit™ RNA IQ分析试剂盒与全新的Qubit™ 4荧光计强强 结合，在5分钟内轻松检测RNA的完整性和质量，帮助您节省时间和花费。
产品主要特点：
便捷-只需使用1 μL样本
简单-只需将RNA样本加入RNA IQ工作液，然后使用Qubit™ 4荧光计检测即可
快速-只需不到5秒就可检测每个样本的RNA降解情
主要用途：与传统紫外分光法不同，Qubit 4采用专门的荧光检测技术和染料，特异性的区分出DNA，RNA，降解核酸，游离核苷酸及蛋白质，即便在低浓度下也具有极高的灵敏度和准确性。当样品稀有且难以处理、当提取后的dsDNA，oligos，RNA（包括microRNA）或蛋白质量很少，当样品将被用于成本昂贵的下游实验，\r\n当样品将用于qPCR或NGS等需要精密测定的实验时您将必须Qubit 4！
JZ区分DNA和RNA：能
Z小样品量：检测1μL样品（10 pg/μL DNA或12.5μg/mL蛋白）
样品处理时间：5秒内快速准确地定量DNA,RNA和蛋白（双核处理器）
动态范围：5个数量级
光源：蓝色LED（470nm），红色LED（635nm）
激发通道：蓝光：430-495nm，红光：600-645nm
发射通道：绿光：510-580nm；红光665-720nm
检测器类型：光电二极管
检测范围：300-1000nm
预热时间：<35秒
标准曲线：2-或3-点
储存样品结果数：Z多储存1,000 个样品结果，可通过U盘导出或直接与电脑连接
操作界面：5.7英寸大尺寸彩色触摸屏，直观的导航按钮
界面系统语言：灵活选择操作语言，包括英语，简体中文，法语，西班牙语，德语，意大利语及日语
RNA完整性检测：可在5min内检测RNA的完整性和质量
DNA分析试剂盒：可选：1 dsDNA HS (高灵敏度)分析试剂盒 (100 assays)，1 dsDNA BR (宽范围)分析试剂盒(100 assays)
RNA分析试剂盒：可选：1 RNA HS分析试剂盒（100 assays)
蛋白分析试剂盒：可选：1 蛋白分析试剂盒(100 assays)
其他：可选：Qubit® 样品管 (500