AML12小鼠肝细胞AML12

AML12小鼠肝细胞AML12在进行细胞传代培养的时候，胰蛋白酶作用的时间是在1～3分钟，由于我有好几个培养瓶（4个以上）的细胞都需要进行传代操作，那么就胰酶消化这一步而言，我是该一个培养瓶一个培养瓶这么分开做，还是可以几个同时做呢？同时做我怕后来操作的培养瓶中的细胞消化过度啊！一个一个的做会不会又太费时呢？

培养基 小鼠肝实质细胞AML12完全培养液配方（100 mL）： DMEM/F-12 (Invitrogen, 11330) 89 ml ITS Liquid Media Supplement (Sigma, I3146) 1 ml Dexamethasone 40 ng/ml FBS (Gibco) 10 ml 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度

1、一个一个做！防止污染，和消化细胞时间的不均匀。

2、原则上，为了避免细胞系之间的污染，应该一个一个的做。但是如果你能保证无菌操作的原则，AML12小鼠肝细胞AML12也能把握好各种贴壁细胞系消化的时间，是可以同时做，这样效率高。建议你刚开始一个一个的做，熟练以后根据具体情况决定如何做。

3、4个可以同时做，时间到了用移液枪给4个瓶加含血清的培养基终止就行。

4、新手的话强烈建议一个一个处理细胞，特别是消化，除非你养的细胞对消化都不敏感，不然很容易消化过度或者不到位。另外同时处理多个细胞容易出现细胞间交叉污染，一旦污染基本没救，比细菌污染还要麻烦。

5、刚开始还是一个一个来，AML12小鼠肝细胞AML12消化的时间与细胞的来源有很大关系，贴壁性强的细胞，需要消化的时间较长。一般除了贴壁性强的癌细胞外，细胞消化时间1-3min，还有胰蛋白酶的浓度有关系，浓度高的消化时间要短一些，不然会消化过了，对于细胞的生长不好。你可以在分散打入胰蛋白酶时，轻晃培养瓶，在显微镜下看见细胞开始变亮，皱缩，卷边的时候就加入培养液或者血清终止消化。

失败的关键原因还是细胞复苏的时候没有迅速解冻的缘故，一次成功是因为注意到这个问题。细胞的复苏及冻存遵循慢冻速融原则，如果AML12小鼠肝细胞AML12取出后没有在尽可能短的时间里解冻的话细胞内部会产生很多冰晶对细胞就有致命的损失了。另外，细胞的确应该是在液氮条件下保存，如果液氮可以保存1-2年的细胞，放-80度保存恐怕不到三个月就不行了，并且状态会很差。ZYC3806    心肌细胞培养基    CMM    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3807    小梁网细胞培养基    TMCM    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3808     滋养层细胞培养基    TM    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3809    脂肪细胞培养基    AdM    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3810    前脂肪细胞培养基    PAM    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3811    脂肪细胞诱导分化培养基    PADM    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3812    间充质干细胞培养基    MSCM    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3813    间充质干细胞-成骨细胞分化培养基    MODM-500    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3814        MODM-250    形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样    培养条件：MEM/F12 +10% FBS