MOBIO NoviPure 土壤总蛋白提取试剂盒

         NoviPure Soil Protein Extraction Kit专门设计用于所有类型土壤微生物胞外、胞内蛋白提取，不受腐殖质等干扰杂质影响。正在申请专利的双缓冲液提取法加上玻璃珠、陶瓷研磨珠能GX裂解细胞，并溶解所有胞外、胞内蛋白质。相对于SDS水煮、热蒸汽与NaOH结合等传统提取方法，蛋白沉淀非常干净不含杂质。加入缓冲液重悬蛋白沉淀后可用于进一步分析或保存。使用NoviPure Soil Protein Extraction Kit提取的蛋白质已经成功地在一维电泳和质谱分析法（2D LC-MS/MS）中使用。为保护珍贵样品，所有试剂及塑料制品都不含任何蛋白酶或蛋白。试剂盒说明书专门优化提取变性蛋白，要提取天然蛋白只需对操作流程进行少许修改即可。

·         蛋白质更干净 - 减少腐殖质干扰

·         得率更高 - GX提取2-5g土壤微生物胞外、胞内蛋白质

·         结果精确 - 质谱分析法、一维电泳、二维电泳（双向电泳、2D电泳）等蛋白质组学应用

图1：使用NoviPure Soil Protein Extraction Kit提取堆肥样品获得更干净的蛋白质

(A) NoviPure Soil Protein Extraction Kit试剂盒法（条带1、2）与蔗糖、苯酚提取法①（条带4、5）分别提取两个加入白念球菌（C. albicans)的5g预先灭菌堆肥样品总蛋白。NoviPure Soil Protein Extraction Kit（条带3）与蔗糖、苯酚法（6）再提取白念球菌（C. albicans）纯培养作为对照。

（B） NoviPure Soil Protein Extraction Kit试剂盒法（条带1、2）与SDS煮沸提取法（条带3、4）分别提取两个加入大肠杆菌（E. coli)的5g预先灭菌堆肥样品总蛋白。

每样取20μl总蛋白跑一维SDS-PAGE电泳，Stain Free凝胶成像系统③可视化处理。NoviPure Soil Protein Extraction Kit所获得的蛋白背景清晰无拖尾，可见蛋白条带。可见腐殖质等干扰杂质非常少。

图2：使用NoviPure Soil Protein Extraction Kit提取复杂类型土壤样品获得高蛋白质得率

使用NoviPure Soil Protein Extraction Kit提取加入了大肠杆菌（E. coli）的5g预先灭菌土壤及沉积物的总蛋白。每样取20μl总蛋白跑一维SDS-PAGE电泳，Stain Free凝胶成像系统③可视化处理。所有样品都能获得清晰蛋白条带，并与大肠杆菌纯培养阳性对照相符。（条带1、2）- 淡水湖沉积物；（3、4）- 泻湖沉积物；（5、6）- 沙滩沙子；（7、8）- 大田土壤；（9、10）- 大肠杆菌纯培养。

图3：使用NoviPure Soil Protein Extraction Kit提取的蛋白质在二维凝胶电泳中获得成功结果

使用NoviPure Soil Protein Extraction Kit提取加入了大肠杆菌（E. coli）的5g预先灭菌土壤及沉积物的总蛋白。每样取20μl总蛋白，pH3-10 二维SDS-PAGE电泳后银染分析。可见蛋白质清晰可见无腐殖质等干扰物。

图4：使用NoviPure Soil Protein Extraction Kit提取的蛋白质在2D LC - MS/MS中获得精确的结果

蛋白质质谱峰图。为强阳离子交换分离后的一部分。由NoviPure Soil Protein Extraction Kit 提取5g加入E. coli灭菌堆肥的总蛋白，胰蛋白酶酶解成肽段，再对这些肽段用2D-MS/MS进行鉴定与分析。原色谱比对SWISSPRO数据库（版本2013年5月）。结果鉴定出1076种不同蛋白。

①Taylor & Williams, 2013 Microb. Ecol. 59:390-99

②Chourey et al. 2010 J. Proteome Res. 9:6615-22

③BIORAD mini PROTEAN® TGX Stain-Free Gels