rProtein G Beads

rProtein G Beads
货号：R8300
规格：5ml
保存：2-8℃
产品介绍：
Protein G 是一种分离自G Streptococci 的细胞壁蛋白，它可通过其Fc 片段结合哺乳动
物IgG。重组protein G 含有高亲和结合位点，减少了非特异性吸附。Protein G 和Protein A
有不同的IgG 结合特性，相比Protein A，Protein G 对牛、羊、马等多克隆抗体有更强的结
合力，它还可以结合不能与Protein A 很好结合的大鼠IgG、人IgG3 和小鼠IgG1，具体结
合能力见表。
rProtein G Beads 产品性能：

ProteinA和ProteinG对不同抗体的结合能力：

++++=结合能力强；++=结合能力中等；—=结合能力弱或没有结合
纯化流程：
1、Buffer 的准备
所用水和Buffer在使用之前建议用0.22μm或0.45 μm滤膜过滤。
结合/ 洗杂Buffer: 0.15MNaCl，20 mMNa2HPO4，pH7.0
洗脱Buffer: 0.1M甘氨酸，pH3.0
中和液： 1MTris-HCl，pH8.5
2、样品准备
上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH 值，可以用结合/洗杂缓冲液对血清样
品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗杂缓冲液透析。
样品在上样前建议离心或用 0.22μm或 0.45μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效
率和防止堵塞柱子。
3、样品纯化
1)将 rProtein G Beads 装入合适的层析柱，层析用5 倍柱体积的结合Buffer进行平衡，使
填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
2)将样品加到平衡好的 rProtein G Beads 中（保证目的蛋白与rProtein G Beads 充分接触，
提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
3)用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
4)使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
5)依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，ZH再用5倍柱
体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4 度保存，防止填料被
细菌污染。
4、SDS-PAGE检测
将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用
SDS-PAGE 检测纯化效果。
填料清洗
rProtein G Beads 可以重复使用而无需再生，但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，
往往造成流速和结合载量都下降，严重影响柱子的性能，这时需要对树脂进行清洗。
去除一些沉淀或变性物质
用 2 倍柱体积的 6M 盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用 5 倍柱体积的 PBS,pH7.4 清
洗。
去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% TritonX-100清洗，然后然后立即用5
倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。
问题及解决方案