基础型QuickShuttle转染试剂

QuickShuttle系列转染试剂说明书

产品描述

QuickShuttle系列转染试剂是一类具有自主知识产权、独特配方的阳离子型转染试剂，具有GX、低毒和易于使用等优点，推荐用于常规哺乳动物细胞系的瞬时转染和稳定细胞系构建。QuickShuttle区别于常规转染试剂的两个最主要特点是：（1）可以在贴壁细胞传代后尚未贴壁时立即进行转染（立传立转）；（2）转染操作可在一分钟内完成。

重要提示

1. 与常规转染试剂不同，使用QuickShuttle可在贴壁细胞传代后尚未贴壁时直接进行转染（立传立转），从而可节省18~24小时的转染前细胞培养时间。

2. QuickShuttle极大简化了转染操作，转染试剂和质粒混合后无需室温静置孵育，可直接加入含血清的细胞培养基中进行转染，而且无需在转染后补加血清或更换培养基，整个转染操作可在一分钟内完成。

3. 立传立转、一分钟完成转染操作和高转染效率等优点使得部分使用QuickShuttle的转染实验可在细胞传代后24小时内完成，从而比常规转染试剂节约24~48小时。

4. 以24孔细胞板转染实验为例，推荐一次（即每孔）转染的低内毒素质粒DNA用量为1~2µg、转染试剂用量为3~5µl（请在正式实验前根据不同细胞和不同培养基用报告基因进行优化），质粒和转染试剂可用无菌生理盐水稀释。

5. QuickShuttle经过DMEM、RPMI-1640和M199等常规培养基测试，虽然在实验中推荐使用DMEM，但有实验结果表明M199能够显著增强QuickShuttle对Vero细胞和293FT细胞的转染效果，因此可尝试使用不同培养基对转染条件进行优化。

6. QuickShuttle设计用于常规哺乳动物细胞系的瞬时转染和稳定细胞系构建，不推荐但可尝SY于哺乳动物原代细胞和二倍体细胞的转染。

7. QuickShuttle转染试剂建议常温运输，2~8ºC保存（在-30 ºC到室温范围内均可长时间稳定保存），无菌取用，有效期18个月。

名称：QuickShuttle-Basic

 (基础型QuickShuttle转染试剂)

货号：KX0110041

含量：0.8 ml

用途：用于大多数哺乳动物贴壁细胞系的瞬时转染和稳定细胞系构建。

注意事项：

1. 质粒DNA：请用能够去除内毒素的方法制备高质量的质粒DNA。

2. 稀释液：0.85%（W/V）生理盐水，用低内毒素纯水配制，高压消毒或CJ过滤。

3. 培养基：经过DMEM、RPMI-1640和M199等常规培养基测试，推荐使用含5~10%牛血清的DMEM，若转染效果不理想可尝试其它培养基。

4. 以24孔细胞板转染实验为例，推荐每孔低内毒素质粒DNA用量为2µg、转染试剂用量为3~5µl，请在正式实验前根据不同细胞和不同培养基用报告基因进行优化。

5. 如果实验目的在于筛选抗药性稳定细胞系，可在细胞传代后尚未贴壁时直接进行转  

染，从而可节省18~24小时的转染前细胞培养时间。

使用方法：

1. 转染前18~24小时接种细胞到24孔细胞板中，每孔5~10x104细胞，1ml完全培养基。备注：如果筛选抗药性稳定细胞系，可以考虑简化的实验步骤，即在细胞传代后直接按下述步骤2~5进行转染，无需18~24小时的等候时间。

2. 将2μg质粒DNA和3~5μl转染试剂分别稀释到50μl生理盐水中。备注：质粒DNA和转染试剂的最适用量需要根据不同培养基来优化，但理论上不超出1~2µg和3~5µl范围。

3. 合并上述两溶液并混匀。备注：无需其它转染试剂所需的10~30分钟的等候时间。

4. 将上述复合物直接加入到细胞培养基中，轻摇细胞板或用加样器吸打混匀。备注：转染复合物可直接加入含血清的细胞培养基中进行转染。在极少情况下会出现贴壁细胞脱落现象，可先从待转染细胞孔中吸取500µl培养基与转染复合物预混后再加入细胞中。若在细胞瓶中进行转染，直接加入到无细胞贴壁的对面或侧面并摇匀即可。

5. 将细胞板移至37ºC/5% CO2孵箱中进行培养。备注：无需在转染后4~6小时补加血清或更换培养基。

6. 24~72小时后根据实验需要进行瞬时表达分析或稳定细胞系加压筛选。