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CRISPR-Cas9 crRNA

产品信息
  • 产品标题

    CRISPR-Cas9 crRNA/crRNA XT

    产品简介
    Alt-R® CRISPR-Cas9 系统将gRNA分成位点特异性的crRNA和序列通用型的tracrRNA两部分,并对天然形式的crRNA和tracrRNA 序列进行优化,将天然形式的crRNA缩短至36个碱基,Alt-R® tracrRNA缩短至67个碱基。
    crRNA/crRNA XT
    • 优化长度的crRNA36 nt,其中包含1920nt的目标特异的protospacer元件区域和16 nttracrRNA结合的区域。在大多数应用中,protospacer元件推荐长度为20 nt
    • 特有的化学修饰避免被细胞内RNases降解,提高基因编辑的中靶率。
    • 在挑战性的实验条件下,推荐使用crRNA XT,包含额外的增强稳定性的化学修饰。
    产品详情
    Alt-R CRISPR-Cas9 crRNA或crRNA XT
    • 需要和tracrRNA搭配使用。
    • 目标特异性RNA oligo,客户定制。
    • 专利化学修饰避免被细胞内RNases降解。
    • crRNA XT 包含可以提高二元gRNA稳定性和编辑表现的额外修饰,适合具有挑战性的实验环境(例如,高核酸酶环境或与Cas9 mRNA一同使用等)。
    Alt-R® CRISPR-Cas9 RNAs 相比其他形式的gRNA 编辑效率高

    1  crRNA:tracrRNA 二元gRNA 复合体比其他形式的gRNA 编辑效率高Cas9 蛋白稳转的细胞系中,分别使用Alt-R® crRNA:tracrRNAS.pyogenes天然CRISPR RNA、体外转录获得的sgRNA、含有sgRNA 的表达质粒(2.7Kb)、含有sgRNA 表达模块的gBlocks® 化学合成基因片段。这种形式的gRNA 通过转染方式导入。结果表明Alt-R® crRNA:tracrRNA 在人HPRT 基因的个测试位点均表现出色。

    三种形式的gRNA 分别组装成RNP 进行基因编辑时具有相近的编辑效率
    对三种形式的gRNA: crRNA:tracrRNA、 crRNAXT:tracrRNAsgRNA分别与Alt-R® Cas9 蛋白组装形成RNP,三者具有相近的基因编辑效率。

    不同形式的gRNARNP形式在细胞中进行基因编辑时,表现出出相近的编辑效率。靶向HPRT基因12个位点的三种gRNAAlt-R Cas9蛋白组装形成RNPCas9 蛋白:gRNA=1:1.2)。不同浓度RNP4 µM或0.25 µM )在2 µM的Alt-R Cas9 Electroporation Enhancer的作用下转入HEK-293细胞系。48小时后提取基因组DNA,利用二代测序(next generation sequencingNGS)方法进行基因编辑效率分析。在挑战性条件下,特殊形式的gRNA 表现更好。

    将三种形式的gRNA: crRNA:tracrRNA、 crRNAXT:tracrRNAsgRNA分别与Cas9 mRNA共同转入细胞系中,在这种具有挑战性的实验条件下,gRNA稳定性与编辑效率密切相关

    图3 不同形式的gRNA与Cas9 mRNA共同转染进行基因编辑时,含有额外的化学修饰,稳定性更好的gRNA类型,编辑效率更高。靶向HPRT2个位点的gRNA(4 µM)与1 µg of Cas9 mRNA共同电转进入HEK-293细胞系。48小时后提取基因组DNA,利用NGS方法进行基因编辑效率分析.

    三种形式的gRNA组装而成的RNP,基因编辑后引入突变类型一致
    对三种形式的gRNA: crRNA:tracrRNA、 crRNAXT:tracrRNAsgRNA分别与野生型Alt-R Cas9 核酸酶或高保真型Alt-R HiFi Cas9核酸酶组合形成RNP。因基因编辑引入的插入/缺失突变一致

    不同形式的gRNA产生的突变类型一致. 靶向EMX1基因12个位点的三种gRNAAlt-R Cas9核酸酶和Alt-R HiFi Cas9核酸酶预组装成RNPCas9 蛋白:gRNA=11.2)。4 µM RNP在2 µM的Alt-R Cas9 Electroporation Enhancer的作用下转入HEK-293细胞系。48小时后提取基因组DNA,利用NGS方法进行基因编辑效率分析。
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    crRNA XT
    系列
    纳昂达货号 产品信息
    205005 Alt-R® CRISPR-Cas9 crRNA XT, 2 nmol
    205006 Alt-R® CRISPR-Cas9 crRNA XT, 10 nmol
    205007 Alt-R® CRISPR-Cas9 crRNA XT, 2 nmol, Plate
    205008 Alt-R® CRISPR-Cas9 crRNA XT, 10 nmol, Plate
     
    crRNA系列 纳昂达货号 产品信息
    205001 Alt-R® CRISPR-Cas9 crRNA, 2 nmol
    205002 Alt-R® CRISPR-Cas9 crRNA, 10 nmol
    205003 Alt-R® CRISPR-Cas9 crRNA, 2 nmol, Plate
    205004 Alt-R® CRISPR-Cas9 crRNA, 10 nmol, Plate
     
      Control       crRNAs         货号 产品信息
    1072544 Alt-R® CRISPR-Cas9 Negative Control crRNA #1, 2 nmol
    1072545 Alt-R® CRISPR-Cas9 Negative Control crRNA #2, 2 nmol
    1072546 Alt-R® CRISPR-Cas9 Negative Control crRNA #3, 2 nmol
    1072541 Alt-R® CRISPR-Cas9 Positive Control crRNA, Human HPRT, 2 nmol
    1072542 Alt-R® CRISPR-Cas9 Positive Control crRNA, Mouse HPRT, 2 nmol
    1072571 Alt-R® CRISPR-Cas9 Positive Control crRNA, Rat HPRT, 2 nmol

    *阳性对照crRNA,其编辑效果均已湿实验验证。
    温馨提示:不可用于临床ZL。
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