4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液，pH8.8北京厂家现货

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4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液，pH8.8北京厂家现货的品Pai：百奥莱博，是优质的蛋白质研究产品，用于生化科学研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液，pH8.8等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液，pH8.8北京厂家现货
品Pai：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：250ml
英文名：4×Tris-HCl-SDS Separating Gel Buffer, pH8.8
编号：SY0354
Tris也称Tris base或2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol。 分子式为C4H11NO3，分子量为121.14。

4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液中含有1.5M Tris base，0.4% SDS，用 HCl调节pH至8.8，25℃。用于SDS-PAGE下层分离胶的配制。配制时无需再加10%SDS。

本品为4倍浓缩液，使用时稀释成1×工作液即可。

储存条件：4℃。

关于4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液，pH8.8北京厂家现货的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·冰冻动植物组织RNA稳定-过渡溶液
编号：SY0268
英文名称：ICE Tissue Stabilizer
规格：100ml
本品是一种新型的冰冻组织过渡溶液，可以帮助解冻冰冻组织，同时保护RNA完整性，从而可以使冰冻组织转变到普通的匀浆方法易于处理的状态，以提取高质量的RNA。处理后的冰冻组织不需要在匀浆前将其碾磨成粉，甚至在匀浆前可以进一步对组织进行切割。加入RNAKeeper-ICE溶液后，组织从坚硬的冰冻状态转变为柔软状态，此时该溶液渗入组织，使RNA酶失活。用本品溶液处理后，组织可以在室温下操作而不用担心RNA会发生降解。而且，样品能被安全的称重，进一步切割，或者进行多种实验而不影响RNA的质量。处理后的组织样品可以直接加入到裂解溶液中破碎，也可以置于-20℃长期保存。

本产品适用于动物组织以及培养细胞、白细胞。经测试，可用于肝、肾、脾、肺、心、胸腺、胰等组织的保存。

本产品与基于异硫*酸胍的RNA提取试剂如Total RNA Extraction Reagent, Trizol，或基于离心柱的RNA提取试剂盒兼容。

应用实例

1. 将本品在-70℃或-80℃预冷。
2. 样品保存：
A.动物组织：按100 mg组织比不小于1 ml 本品的比例，将冰冻组织浸没于预冷的本品中。注意：组织块的厚度应不超过0.5 cm，否则会影响本品的渗透效率，导致RNA稳定效果变差。
B.培养细胞、白细胞：收集细胞，用PBS清洗后加入至少10倍体积本品，盖紧管盖，上下颠倒数次。此时沉淀是否被完全悬浮对实验无影响。
3. 将浸没于本品的组织转移至-20℃存放。至少16小时后，组织即可匀浆进入后续提取过程；若不立即匀浆，组织可继续在-20℃稳定存放6个月。这个过程中，组织可从溶液中取出，在室温进行切割、称重等操作(注意在室温暴露的时间不要超过30分钟)后继续浸没在本品中保存。
4. RNA提取：将组织取出，用镊子轻轻挤掉多余的本品溶液，置于裂解液中，立刻匀浆。如果是细胞样品，10000g，4℃离心1分钟，弃上清，加入裂解液。


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·小鼠抗β-肌动蛋白单克隆抗体
编号：SY0632
英文名称：Mouse anti-β-actin mAb
规格：10μl(＞50次)
本品为小鼠抗β-肌动蛋白单克隆抗体，小鼠抗β-actin单克隆抗体。推荐稀释倍数：WB（1:5000-1:50000），IF（1:100-1:500），IP（1:5000-1:50000），FC（1:10-1:100），IHC（1:200-1:1000）

β-肌动蛋白是已知的肌动蛋白六种异构体中的一种，是由375个*基酸组成的细胞骨架蛋白，分子量大小为42kDa左右。广泛分布于细胞浆中，表达量非常丰富。β-actin作为一种管家基因编码表达的蛋白（Housekeeping Protein），在不同物种之间高度保守。因此，在大多数组织和细胞中常被用作内参，即内部参照（Intern Control）。普遍应用于Western Blot实验来校正蛋白质定量、上样过程中存在的误差，确保实验的准确性。

产品类型：小鼠单克隆抗体（Mouse Monoclonal, mAb）IgG2b
反应性：Human, Mouse, Rat, Hamster, Zebrafish
应用：ELISA, IF, WB, IHC, FC, IP
抗原分子量：～42kDa
储存缓冲液：含0.02%叠氮*、50%甘油的PBS，pH7.3
免疫原：Fusion Protein
纯化方式：Protein A 纯化
储存条件：-20℃，避免反复冻融。

·His标签蛋白纯化预装柱
编号：SY0394
英文名称：Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 5ML
规格：5ml|1ml
Ni-NTA Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸（NTA）为配体，螯合镍离子（Ni2+）后，形成非常稳定的八面体结构，镍离子处于八面体的ZX，这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻，更加稳定，可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。此外，因其基质的耐压性（该基质可以耐受ZG0.3 MPa的压力），该产品可以用于工业大规模蛋白的纯化，可在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化。

Ni-NTA 6FF Chromatography Column是一种以Ni-NTA Agarose Resin 6FF为填料的中压预装柱，该预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户用于纯化His-tag蛋白。

基质（Matrix）：高度交联的6%琼脂糖凝胶
孔径（Bead size）：45-165µm
载量（Capacity）：＞40mg 6×His-tagged protein/ml 基质
耐压（Tolerance Pressuremax）：0.3MPa, 3bar
储存缓冲液：含20%乙醇的1×PBS
柱子尺寸（Column Size）：0.7×2.5cm（1ml）
储存条件：4℃保存，有效期2年

注意事项
1）建议纯化所用缓冲液和蛋白溶液经0.22µm或0.45µm滤膜过滤后上柱使用。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法
（一）纯化流程

1 缓冲液的准备
缓冲液使用原理：低咪唑上样，高咪唑洗脱，或者高pH上样，低pH洗脱。Buffer 在使用前用0.22µm或0.45µm滤膜过滤CJ。可溶性组*酸标签蛋白纯化所需配方详见附表1。包涵体组*酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表2。

2 样品准备
2.1 细菌表达的蛋白（本说明以细菌表达蛋白为例）
1）挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中，根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。
2）表达结束后，将培养液转至离心瓶，7000rpm，离心15min，收集菌体，然后加入1/10体积的裂解液（Lysis buffer）和PMSF（PMSF在破碎前加入，其终浓度为1mM），同时也可加入其他蛋白酶YZ剂，但不能影响目的蛋白与树脂的结合。
3）之后加入溶菌酶，使其工作浓度为1mg/ml。【注】：如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加入溶菌酶。
4）将菌体沉淀悬浮起来（如果菌液浓度高，可考虑加入10µg/ml RNase A和5µg/ml DNase I），混匀，置于冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。
5）收集上述澄清蛋白液，10000rpm，4℃离心20-30min。取上清，0.22µm/0.45µm滤膜过滤后，置于冰上备用或-20℃保存。
2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白
将细胞培养液转移至离心瓶，5000rpm离心10min，收集上清。如上清中不含EDTA、组*酸和还原剂等，即可直接上柱纯化；如含有EDTA、组*酸和还原剂等物质，则需用1×PBS 4℃下透析后方可上柱。
【注】：对于大量体积的上清，需加入硫*(代"酸")铵进行沉淀浓缩，之后经1×PBS 4℃下透析后上柱。
2.3 包涵体蛋白纯化（以细菌为例）
1）将培养液转移至离心瓶，7000rpm，离心15min，收集菌体去上清。
2）按照菌体：裂解液=1:10（w/v）的比例将菌体充分悬浮，混匀，冰浴超声破碎。
3）将破碎液转移至离心管，10000rpm，4℃离心20-30min，去上清。可重复步骤2）和3）一次。
4）按照菌体：裂解液（含8M尿素）=1:10（w/v）的比例将包涵体充分悬浮。
5）变性条件下纯化His标签蛋白纯化。

3 样品纯化（以AKTA使用为例）
1）将泵管道注满去离子水。去掉产品上塞，连接至色谱系统中，再折断下口，将预装柱连接到色谱系统中，注意旋紧。
2）3-5倍柱体积去离子水冲洗出存储缓冲液。
3）至少5倍柱体积的Lysis Buffer 平衡色谱柱。推荐流速为5ml/min。
4）利用泵或注射器上样。【注】：若样品粘度增加，即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压；上样量不要超过柱子的结合能力；大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）Wash Buffer 平衡柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。【注】：在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。
6）Elution Buffer一步法或梯度法进行洗脱。一步法洗脱中一般5倍柱体积洗脱液即可。梯度洗脱可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多来分离不同结合强度的蛋白质。
7）建议用更高浓度咪唑（如500mM）彻底清洗纯化柱上结合的杂蛋白。随后依次用3倍柱体积的Lysis Buffer和5倍柱体积的去离子水清洗树脂。5倍柱体积的20%乙醇平衡树脂，ZH将树脂保存在20%乙醇的1×PBS中，置于4℃保存。

4 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

（二）在位清洗
当填料使用过程中发现反压过高（＞0.5Mpa）或者填料上面出现明显的污染时，需对其进行在位清洗（Cleaning-in-Place，CIP）。在位清洗时，先把Ni2+脱掉，清洗结束后，将填料保存在20%乙醇中，后者重新挂Ni后再保存在20%乙醇中。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物，如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。
1 去除强疏水结合的蛋白，脂蛋白和脂类
使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积，接触时间为15-20min可以去除此类污染物。之后再用去离子水清洗10倍柱体积。也可以选择使用含有去污剂的酸性或者碱性溶液清洗填料2倍柱体积。例如含有0.1-0.5%非离子去污剂的0.1M醋酸溶液，接触时间为1-2h。去污剂处理后，需用70%的乙醇清洗5倍柱体积，彻底去除去污剂。ZH利用去离子水清洗10倍柱体积。
2 去除离子作用结合的蛋白
使用1.5M NaCl 溶液接触10-15min，之后用去离子水清洗10倍柱体积。

（三）填料再生
当填料使用过程中发现反压过高（＞0.5Mpa），填料上面出现明显的污染，或填料载量明显变低时，需要对其进行镍离子剥离及重新挂镍处理，即填料再生。按照下面操作流程进行：
1）使用0.2M 醋酸溶液（含6M GuHCl）清洗2倍柱体积；
2）去离子水清洗5倍柱体积；
3）2%SDS清洗3倍柱体积；
4）去离子水清洗5倍柱体积；
5）乙醇清洗5倍柱体积；
6）去离子水清洗5倍柱体积；
7）100mM EDTA（pH 8.0）清洗5倍柱体积；
8）去离子水清洗5倍柱体积；
9）100mM NiSO4清洗5倍柱体积；
10）去离子水清洗10倍柱体积。

填料再生后，可立即使用，也可保存在20%乙醇中，置于4℃备用。


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