北京R-藻红蛋白标记山羊抗小鼠IgG(H+L)F(ab)2片段哪里卖

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名称：北京R-藻红蛋白标记山羊抗小鼠IgG(H+L)F(ab)2片段哪里卖
产地：国产|进口
规格：100μl
英文名：R-Phycoerythrin AffiniPure F(ab)2 fragment Goat Anti-Mouse IgG (H+L)
编号：SY0692
品Pai：百奥莱博
本品是由R-藻红蛋白标记的山羊抗小鼠IgG（H+L）F(ab)2片段，是将山羊抗血清经胃蛋白酶消化并使用抗原偶联的琼脂糖微珠亲和色谱纯化所得，借此可去除Fc片段和完整IgG分子。免疫电泳和/或ELISA法检测显示本品特异性结合完整的小鼠IgG分子，也会与其他小鼠免疫球蛋白的轻链结合。本品预先与相近物种包括人、牛、马、兔和猪的血清蛋白经过亲和吸附处理，ELISA和/或固相免疫吸附检测证实本品与以上物种几乎无交叉反应。但可能会与其他物种免疫球蛋白发生交叉反应。本品不会与非免疫球蛋白类的血清蛋白发生交叉反应。R-藻红蛋白的Amax（ZD激发波长）为490nm,545nm,566nm，Emax（ZD发射波长）为580nm。本品可做多标实验，应用于流式细胞术（FC）等实验。

藻胆（色素）蛋白浓度：0.5mg/ml
缓冲液：0.01M 磷酸*，0.25M *化*, pH 7.6
稳定剂：15mg/ml BSA（无IgG，蛋白酶）
荧光素：Phycoerythrin Amax=490nm,545nm,566nm;Emax=580nm
防腐剂：0.05% 叠氮化*
原料来源：Jackson Immunoresearch 115-116-146
推荐稀释比例：1:50～200（适用于大多数实验）
储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期一年。

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·His标签蛋白琼脂糖纯化树脂
编号：SY0392
英文名称：Ni-NTA Agarose Resin
规格：10ml
Ni-NTA Agarose Resin以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸（NTA）为配体，螯合镍离子（Ni2+）后，形成非常稳定的八面体结构，镍离子处于八面体的ZX，这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻，与Ni-IDA树脂相比，更加稳定，可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。已经成为实验室纯化His标签蛋白不可获取的树脂之一。

基质（Matrix）：高度交联的4%琼脂糖凝胶
孔径（Bead size）：45-165µm
载量（Capacity）：＞40mg 6×His-tagged protein/ml 基质
耐压（Tolerance Pressuremax）：0.1MPa, 1bar
储存缓冲液：含20%乙醇的1×PBS
储存条件：4℃，有效期2年。


使用方法

（一）纯化流程

1 缓冲液的准备
缓冲液使用原理：低咪唑上样，高咪唑洗脱，或者高pH上样，低pH洗脱。Buffer 在使用前用0.22µm或0.45µm滤膜过滤CJ。可溶性组*酸标签蛋白纯化所需配方详见附表1。包涵体组*酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表2。

2 样品准备
2.1 细菌表达的蛋白（本说明以细菌表达的蛋白纯化为例）
1）挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中，根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。
2）表达结束后，将培养液转至离心瓶，7000rpm，离心15min，收集菌体，然后加入1/10体积的裂解液（Lysis buffer）和PMSF（PMSF在破碎前加入，其终浓度为1mM），同时也可加入其他蛋白酶YZ剂，但不能影响目的蛋白与树脂的结合。
3）之后加入溶菌酶，使其工作浓度为1mg/ml。【注】：如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加入溶菌酶。
4）将菌体沉淀悬浮起来（如果菌液浓度高，可考虑加入10µg/ml RNase A和5µg/ml DNase I），混匀，置于冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。
5）收集上述澄清蛋白液，10000rpm，4℃离心20-30min。取上清0.22µm或0.45µm滤膜过滤后置于冰上备用或-20℃保存。
2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白
将细胞培养液转移至离心瓶，5000rpm离心10min，收集上清。如上清中不含EDTA、组*酸和还原剂等，即可直接上柱纯化；如含有EDTA、组*酸和还原剂等物质，则需用1×PBS 4℃下透析后方可上柱。
【注】：对于大量体积的上清，需加入硫*(代"酸")铵进行沉淀浓缩，之后经1×PBS 4℃下透析后上柱。
2.3 包涵体蛋白纯化（以细菌为例）
1）将培养液转移至离心瓶，7000rpm，离心15min，收集菌体去上清。
2）按照菌体：裂解液=1:10（w/v）的比例将菌体充分悬浮，混匀，冰浴超声破碎。
3）将破碎液转移至离心管，10000rpm，4℃离心20-30min，去上清。可重复步骤2）和3）一次。
4）按照菌体：裂解液（含8M尿素）=1:10（w/v）的比例将包涵体充分悬浮。
5）变性条件下纯化His标签蛋白纯化。

3样品纯化

1）装柱：将Ni-NTA Agarose Resin借助重力的作用装入合适的纯化柱中。
2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗色谱柱。
3）平衡：至少5倍柱体积的Lysis Buffer 平衡色谱柱。
4）上样：注意控制加样速度，确保目的蛋白与Ni2+充分接触，以提高纯化得率。
【注】：注意收集流出液，用于后续SDS-PAGE检测蛋白的结合情况。
5）平衡/洗杂：Wash Buffer 平衡柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。注意收集流出液。
【注】：在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。
6）洗脱：使用5-10倍柱体积Elution Buffer洗脱，收集洗脱液即目的蛋白溶液。
7）清洗：依次用3倍柱体积的Lysis Buffer和5倍柱体积的去离子水清洗树脂。
【注】：建议在清洗之前用更高浓度咪唑（如500mM）彻底清洗纯化柱上结合的杂蛋白。
8）保存：5倍柱体积的20%乙醇平衡树脂，ZH将树脂保存在20%乙醇的1×PBS中，置于4℃保存。

4 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

（二）在位清洗
当填料使用过程中发现反压过高（＞0.5Mpa）或者填料上面出现明显的污染时，需对其进行在位清洗（Cleaning-in-Place，CIP）。在位清洗时，先把Ni2+脱掉，清洗结束后，将填料保存在20%乙醇中，后者重新挂Ni后再保存在20%乙醇中。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物，如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。

1 去除强疏水结合的蛋白，脂蛋白和脂类
使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积，接触时间为15-20min可以去除此类污染物。之后再用去离子水清洗10倍柱体积。也可以选择使用含有去污剂的酸性或者碱性溶液清洗填料2倍柱体积。例如含有0.1-0.5%非离子去污剂的0.1M醋酸溶液，接触时间为1-2h。去污剂处理后，需用70%的乙醇清洗5倍柱体积，彻底去除去污剂。ZH利用去离子水清洗10倍柱体积。

2 去除离子作用结合的蛋白
使用1.5M NaCl 溶液接触10-15min，之后用去离子水清洗10倍柱体积。

（三）填料再生

当填料使用过程中发现反压过高，填料上面出现明显的污染，或填料载量明显变低时，需要对其进行镍离子剥离及重新挂镍处理，即填料再生。按照下面操作流程进行：

1）使用0.2M 醋酸溶液（含6M GuHCl）清洗2倍柱体积；
2）去离子水清洗5倍柱体积；
3）2%SDS清洗3倍柱体积；
4）去离子水清洗5倍柱体积；
5）乙醇清洗5倍柱体积；
6）去离子水清洗5倍柱体积；
7）100mM EDTA（pH 8.0）清洗5倍柱体积；
8）去离子水清洗5倍柱体积；
9）100mM NiSO4清洗5倍柱体积；
10）去离子水清洗10倍柱体积。

填料再生后，可立即使用，也可保存在20%乙醇中，置于4℃备用。


附表1 可溶性His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方

 

缓冲液名称	配方	配制1L溶液所需各种试剂量
Lysis Buffer (pH8.0)	50mM NaH2PO4 300mM NaCl 10 mM imidazole NaOH调pH至8.0, 0.22µm或0.45µm过滤CJ	NaH2PO4 ·2H2O    7.8g NaCl             17.54g Imidazole         0.68g
Wash Buffer (pH8.0)	50mM NaH2PO4 300mM NaCl 20 mM imidazole NaOH调pH至8.0, 0.22µm或0.45µm过滤CJ	NaH2PO4 ·2H2O    7.8g NaCl             17.54g Imidazole         1.36g
Elution Buffer(pH8.0)	50mM NaH2PO4 300mM NaCl 250 mM imidazole NaOH调pH至8.0, 0.22µm或0.45µm过滤CJ	NaH2PO4 ·2H2O    7.8g NaCl             17.54g Imidazole         17.0g

附表2 包涵体His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方

缓冲液名称	配方	配制1L溶液所需各种试剂量
Lysis Buffer (pH8.0)	8M Urea 100mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 盐*(代"酸")溶液调pH至8.0, 0.22µm或0.45µm过滤CJ	Urea             480.5g NaH2PO4 ·2H2O    15.6g Tris              15.76g
Wash Buffer (pH6.3)	8M Urea 100mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 盐*(代"酸")溶液调pH至6.3, 0.22µm或0.45µm过滤CJ	Urea             480.5g NaH2PO4 ·2H2O  15.6g Tris              15.76g
Elution Buffer(pH4.50)	8M Urea 100mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 盐*(代"酸")溶液调pH至4.5, 0.22µm或0.45µm过滤CJ	Urea             480.5g NaH2PO4 ·2H2O    15.6g Tris             15.76g

附表3 Ni-NTA Agarose Resin试剂耐受情况

试剂种类	浓度
还原剂	5mM DTE 0.5-1 mM DTT 20mM β-mercaptoethanol 5mM TCEP 10mM reduced glutathione
变性剂	8M urea 6M Gua-HCl
去污剂	2% TritonTM X-100(nonionic) 2% TweenTM20(nonionic) 2% NP-40(nonionic) 2% Cholate (anionic) 1% CHAPS (zwitterionic)
其他类	500mM imidazole 20% ethanol 50% glycerol 100mM Na2SO4 1.5M NaCl 1mM EDTA 60mM citrate
缓冲液	50mM sodiu*(代"m") phosphate, pH7.4 100mM Tris-HCl, pH7.4 100mM Tris-acetate, pH7.4 100mM HEPES, pH7.4 100mM MOPS, pH7.4 100mM sodiu*(代"m") acetate, pH7.4

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·10%预制胶，12孔
编号：SY0373
英文名称：Precast Protein Gels, 10%, 12 wells
规格：1盒（10块）
本品通过pH中性缓冲液制备，丙*(代"烯")酰胺与甲叉丙*(代"烯")酰胺配比是29：1，其规格为浓缩胶5%，分离胶10%，胶板尺寸10×8cm，凝胶厚度1 mm，12孔梳齿，单孔ZD上样量30 µl。电泳及转膜缓冲液使用传统的tris-glycine缓冲液，蛋白条带直且尖锐。本品兼容Biorad，天能及北京六一的mini胶电泳槽及其他任何胶板宽度在10 cm的电泳槽。

N,N-亚甲基双丙*(代"烯")酰胺（甲叉丙*(代"烯")酰胺）交联剂的浓度不同从而分离不同大小范围的蛋白质。与传统实验室自行配制凝胶相比，使用预制胶具有以下优点：1）即开即用，不用再配制N种溶液、灌胶、等胶凝固，节省了宝贵的时间和精力；2）不用接触几种具有积累性神经毒性的试剂（丙*(代"烯")酰胺/甲叉丙*(代"烯")酰胺：神经毒性和遗传毒性；TEMED：强神经毒；过硫*(代"酸")铵：可严重损伤呼吸道，眼睛，皮肤）；3）大规模生产，胶与胶之间重复性好，质量稳定，不像手工灌胶那样结果差异大。

使用方法

1）剪开包装取出胶，撕去胶板底端胶纸，将预制胶固定在电泳槽中，加入电泳缓冲液没过梳齿部位，双手按住梳子左右部位将其平稳缓慢（一定要慢，否则会将胶齿拔断或拔歪）拔出，在前后板的上方ZY卡上一个“V”型卡（通过加固前后板，不仅可防止枪头上样用力过猛撬开两板产生缝隙，还可稳定跑胶质量，电泳过程中“V”型卡不可取出），上样后进行电泳，电泳后取出胶板，用镊子或小螺丝刀沿左右两板间的缝隙将两板别开，将胶取出，弃去塑料板。
2）电泳：使用《分子克隆》指定的 tris-glycine电泳缓冲液（tris 25 mM, glycine 250 mM, SDS 0.1%）。推荐使用低压100V，15min换高压150V跑至电泳结束。
3）转膜：使用《分子克隆》的 tris-glycine 电转缓冲液（含 20%甲醇或乙醇），操作与实验室原有操作完全相同。

储存条件：4℃，有效期一年。

注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本品含有的部分试剂如丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺有毒，对人体有害，请注意适当防护。
3）电泳及电转缓冲液建议使用新配制的缓冲液，试剂纯度不够，反复使用或长期放置过的缓冲液会降低电泳效果。传统《分子克隆》的tris-glycine 电泳及电转缓冲液是不用 NaOH 和 HCl 调整 pH ，因为引入的*离子和*离子会影响电泳效果。
4）电泳前请务必撕去胶板底端的胶纸，否则电路不通，无法电泳。
5）拔梳子时浸没在电泳缓冲液中拔，一方面由于液体润滑梳子更容易拔，另一方面不会产生气泡。另外拔梳子时越慢越好，如此可防止梳齿被拔断或拔歪。
6）在电泳后开板取胶时，用小号一字螺丝刀或中号镊子插入左右两板间缝隙，用力搬动，两板即可应声分开，此时两板底部还不能分开，要通过掰开两板取出凝胶。
7）在上样前，使用“V”型卡加固前后板（加样和电泳过程“V”型卡不可移动或拔出），使用时只需将一个“V”型卡“轻轻地”（不必卡到底，不掉即可）卡在前后板的上端中间区域，可确保上样不会产生板胶间的缝隙从而导致样品泄露，电泳时“V”型卡不必取出如此可有助于稳定跑胶质量。
8） 本预制胶对于Biorad和天能的电泳内外槽存在微小泄露，可通过两种方式解决本问题：一是内槽加满缓冲液，外槽液面加至距内槽液面3-5mm，从而可防止在电泳过程中内槽液面逐步下降。另一种解决方式是将Biorad的硅胶封闭垫取出后反过来安装，使其没有凸起的平滑面朝外，从而防止漏液。


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BL1318 dNTPs Mix(10mM each)
*化银 PMP 7785-23-1
HC0298 八道可调半支灭菌移液器
磷酸酶YZ剂  50× 1ml|5ml
三异辛胺 DABITC 25549-16-0
F030231 HRP标记兔抗绵羊IgG抗体 Rabbit Anti-Sheep IgG*HRP
雌二醇 Fmoc-Ser-OH 50-28-2
ARB11451 人缺血修饰白蛋白(IMA)酶联免疫定量检测 Human ischemia modified albumin,ima ELISA KIT
苦酮酸 H-Leu-Ome?HCl 550-74-3
ARB12346 大鼠层连蛋白/板层素(LN)elisa检测说明书 Rat laminin,ln ELISA KIT
F030508 FITC标记兔抗人血清白蛋白抗体 Rabbit Anti-HSA*FITC
*检测试剂盒(甲基麝香草酚蓝比色法)   50T
SJ0725 D-Hank，s 含酚红 含** 
BTN100940 石蜡包埋组织全基因组扩增试剂盒 FFPE WGA Kit
BL1120 柠檬酸*缓冲液0.01mol/L， pH6.0，干粉
ARB12926 小鼠半乳糖6硫*(代"酸")酯酶(GAl-6S)酶免分析 Mouse galactose-6-sulphate sulphatase,gal-6s ELISA KIT
PY02-211  产芽孢肉汤  250克  

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