北京人CD51/IntavB3重组蛋白说明书

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名称：北京人CD51/IntavB3重组蛋白说明书
规格：100ng
编号：ZN1594
产地：国产|进口
来源：大肠杆菌
特异性：人
应用：WB 阳性对照
形态：冻干粉
纯度：>98%，RP-HPLC&SDS-PAGE
保存条件：-20℃保存 1 年以上，避免反复冻融。

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细菌外膜蛋白提取试剂盒 Bacterial outer membrane protein extraction kit  50T|100T
NF-261 冻干抗人HBSAg血清
ARB10611 人血红蛋白C(HbC)酶标法分析 Human hemoglobin c,hbc ELISA KIT
β-*酚紫 Okadaic acid sodiu*(代"m") salt 7143-21-7
N-叔丁氧羰酰-L-白*酸酰甘*酰-L-精*酸对硝基*(代"*")酰胺盐*(代"酸")盐 α-Lactalbumin
非特异结合性封闭液   100ml
ARB13075 小鼠肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TSGF)酶免分析 Mouse tumor specific growth facter/tumor supplied group of factor,tsgf ELISA KIT
989-38-8 Sundan BlackB 苏丹黑B
CYB164034 兔抗马IgG(1：500～1000)-HRP
F030809 BIOTIN标记山羊抗小鼠IgG3抗体 Goat Anti-Mouse IgG3*BIOTIN
ARB12394 大鼠单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)elisa检测操作说明书 Rat monocyte chemotactic protein 3,mcp-3 ELISA KIT
BTN130855 T4 RNA连接酶 2(双链RNA连接酶) T4 RNA Ligase 2
NF-219 羊抗人B因子血清
ARB11139 人肿瘤坏死因子α转化酶(TACE)Elisa定量检测 Human tnf α converting enzyme,tace ELISA KIT
ARB12081 大鼠内脂素/内脏脂肪素(visfAtin)ELISA检测服务 Rat visfatin ELISA KIT
ARB13674 兔血小板膜糖蛋白ⅡbⅢA(GP-ⅡbⅢACD41+CD61)酶免分析 Rabbit  platelet membrane glycoprotein ⅡbⅢa,gp-ⅡbⅢa ELISA KIT
孕酮 Isovanillic acid 57-83-0
ARB10992 人沙眼衣原体(CT)ELISA检测服务 Human chlamydia trachomatis,ct ELISA KIT
BTN131228 Tth 核酸内切酶 IV Tth Endonuclease IV
北京人CD51/IntavB3重组蛋白说明书关键词：人CD51/IntavB3重组蛋白,百奥莱博,ZN1594

ARB13203 小鼠脑红蛋白(NGB)酶标法分析 Mouse neuroglobin,ngb ELISA KIT
ARB11703 人雄激素受体(AR)检测服务 Human androgen receptor,ar ELISA KIT
PY02-057  四硫*(代"磺")酸*煌绿增菌液基础(TTB)GB  250克  
BL1108 一抗稀释液
Pfu酶 TSPP decahydrate
PY02-027  G-N增菌培养基  250克  
F030506 FITC标记兔抗牛酪蛋白抗体 Rabbit Anti-casein*FITC
BTN130812 凋亡DNAOUT Apoptotic DNAOUT
ARB11264 人骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)elisa检测操作说明书 Human bone morphogenetic protein receptor 1a,bmpr-1a ELISA KIT
ARB13589 兔子血栓调节蛋白(TM)定量分析 Rabbit thrombomodulin,tm ELISA KIT
ARB10490 人白介素3(IL-3)含量检测 Human interleukin 3,IL-3 ELISA KIT
邻甲*(代"酚")酞络合剂 CSA 2411-89-4
钼酸铵负染色液  3% 100ml
司他夫定 DL100 3056-17-5
间*基*甲*(代"酸") Trifluralin 99-05-8
碳酸*胭脂红染色液   100ml
PY08-042  亮绿乳糖胆盐肉汤 10ml  10支/盒，用于大肠菌群，大肠杆菌的测定
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·Growth hormone/GH mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN0615
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：rat,mouse,hμman
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.Growth hormone/GH mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以YZRNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到ZJ的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
Growth的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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