北京现货大型质粒大量提取试剂盒(＞10kb质粒)优惠

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名称：北京现货大型质粒大量提取试剂盒(＞10kb质粒)优惠
编号：ALH091
规格：20次
品Pai：百奥莱博
产地：国产|进口
本试剂盒适用于BAC/PAC/P1/Cosmid等大型质粒制备。常规的离心柱型质粒抽提试剂盒并不适用于BAC/PAC/P1/Cosmid等大型质粒DNA的抽提。这主要是因为大型质粒DNA分子量很大，常常会超过100kb而且一般拷贝数低产量低，使用常规的离心柱吸附膜吸附效率和产量很低而且过膜会打断这些大分子量的质粒DNA。本试剂盒采用改进碱裂解法从培养菌中提取质粒DNA，采用独特的溶液配方和内毒素清除试剂，只需要几次简单离心去除蛋白质、多糖、内毒素、RNA等杂质，获得高质量的质粒DNA。纯化DNA的OD260/280通常在1.8左右，得到的质粒可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的工作中。纯化后期过程均在Eppendorf管中操作，方法简单，不需特殊设备，无需过柱，不用酚*仿抽提；基本可完全回收细菌裂解释放出的质粒，不必担心质粒DNA的丢失。本方法提取纯化质粒DNA，对质粒损伤小，即使是10kb甚至100kb以上的大型质粒或超大型BAC/PAC质粒，只要碱裂解法能够提取，就可以有效纯化。此外溶液型的试剂可以按照比例放大缩小进行小提/中提/大提，ZH可选择任意小体积溶解质粒，浓度可高达3μg/μl。

试剂盒组份(20次)：
RNaseA(10mg/ml)-————————1.3ml
溶液P1—————————————130ml
溶液P2—————————————100ml
溶液PⅢ-————————————110ml
杂质清除剂A-——————————3ml
杂质清除剂B-——————————30ml
内毒素清除剂——————————10ml

试剂盒特点：
1.不需要使用有毒的*酚，*仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。快速、 方便、从150-200 ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.4-1mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80-90 %。
2.获得的质粒产量高，超螺旋比例高，纯度好，可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
3.内毒素含量极低（<0.1 EU/μg DNA），可直接应用于细胞转染。

注意事项
1. 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb 的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、PⅢ的用量。
2. 提取大质粒时操作动作要轻柔，应该使用剪大了开口的吸头，防止机械剪切对DNA 的损坏。
3. DNA 沉淀液沉淀离心后，可能看不到明显沉淀。如未见沉淀，担心DNA 丢失，可保留上清液，待完成全部操作后电泳鉴定，以确定是否获得终产物（数百微克DNA 离心沉淀在管的侧壁上，可能无法看到明显团块）。
4. 得到的质粒DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1 相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带，也可能为2 条或者多条DNA 条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过95%。
5. 质粒DNA 确切分子大小， 必须酶切线性化后，对比DNA 分子量Marker 才可以知道。处于环状或者超螺旋状态的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道确切大小。

储存条件：室温，有效期18个月。

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·Pfu DNA聚合酶
编号：ALH223
英文名称：Pfu DNA Polymerase
规格：500U|3000U
本酶用于DNA的高保真扩增，，如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变分析（SNP）和平末端补平等。是从克隆有Pyrococcus furiosis DNA Polymerase 基因的大肠杆菌中分离纯化的， Pfu DNA Polymerase具有5′-3′DNA聚合酶活性和3′-5′外切酶活性，能纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配。Pfu酶是目前已发现的所有耐高温DNA Polymerase中出错率ZD的。其PCR产物为平端，可直接用平端载体克隆。 高保真PFU对于dNTP纯度要求很高，因此建议用本酶配套的超纯dNTP mix。本酶浓度为5U/μl。

本品组份(500U)：
Pfu DNA Polymerase———————————————500U
10×Pfu Buffer+(with MgSO4)-——————————1ml
SuperPure dNTP mix(10 mM Each)—————————0.2ml

单位定义：一个单位Pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板引物，将10nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

质量控制：SDS-PAGE检测纯度大于99%,经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。

酶贮存缓冲液：50mM Tris-HCl(pH 8.2)，0.1mM EDTA，1mM DTT，Stabilizers，50% glycerol。

10×Pfu Buffer (含Mg2+)：200 mM Tris-HCl (pH8.8)，100 mM KCl，100 mM(NH4)2 SO4，20 mM MgSO4，其他成分。

注意事项：
(1) Pfu酶具有3′-5′的外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度比Taq酶低，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间，建议Pfu酶的延伸速度为每分钟1kb 如扩增片段小于4kb；延伸速度为每分钟0.5kb 如扩增片段大于4kb。同时Pfu酶的3′-5′的外切酶活性可能降解引物， 所以应先加dNTP 后，再加Pfu酶到反应体系中，并立即进行PCR 反应。
(2) 用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，Tm在55～80℃ 之间，引物浓度在0.1～0.5μM之间，比Taq酶略高。
(3) Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。
(4) 高保真PFU 对于dNTP纯度要求很高，因此建议用本酶配套的超纯dNTP mix。

储存条件：-20℃。


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