48T/96T 人流感病毒 H3N2 Elisa试剂盒

人流感病毒 H3N2 Elisa试剂盒  人流感病毒(H3N2)定性检测试剂盒(ELISA)使用说明书                                                                                                                             【试剂盒名称】人流感病毒(H3N2)定性检测试剂盒(ELISA) 【试剂盒用途】定性检测人血清、血浆及相关液体样本中流感病毒(H3N2)。 【检测原理】本试剂盒采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将阴性对照、阳性对照、待测样本和酶标工作液加入到预先包被人流感病毒(H3N2)抗体的透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入显色剂A、B液，显色剂(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人流感病毒(H3N2)浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据阴性对照、阳性对照和样品的OD值，判断样本中是否含有人流感病毒(H3N2)。 【试剂盒组成】

1	酶标包被板	12孔×8条	7	显色剂A液	6mL
2	阴性对照	0.6mL	8	显色剂B液	6mL
3	阳性对照	0.6mL	9	终止液	6mL
4	20倍浓缩洗涤液	25mL	10	说明书	1份
5	样本稀释液	6mL	11	封板膜	2张
6	酶标试剂	10mL	12	密封袋	1个

 【需要而未提供的试剂和器材】1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸  【操作步骤】1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。3、加对照品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置阳性对照孔、阴性对照孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在对照品孔中加入阳性对照品和阴性对照品各50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍)；每孔再加入酶标工作液100μL；空白对照孔不加。4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。6、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，37℃避光显色15min。7、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。8、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。 【样本要求】1、样本不能含叠氮钠(NaN3)，因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的YZ剂。2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。 【注意事项】1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。4、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。5、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。6、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。7、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。 【结果判断】1 试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；                阴性对照孔OD值平均值≤0.15。2 临界值(Cut off)计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.153 阴性判断：样品OD值＜临界值(Cut off)，样品为阴性4 阳性判断：样品OD值＞临界值(Cut off)，样品为阳性 【操作程序总结】 准备试剂，样品和对照品   加入准备好的样品、对照品品和酶标工作液，37℃反应60分钟 洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟 加入终止液 15分钟之内读OD值 计算【规格】96人份/盒【贮藏】2-8℃，避光防潮保存。【有效期】6个月