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Mouse Tissue Direct PCR Kit 小鼠组织直接PCR试剂盒

产品信息
  • 产品描述
    小鼠组织直接PCR试剂盒是一款可快速对小鼠鼠尾、鼠耳、肌肉等组织样本进行PCR扩增的试剂盒。本试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系，可以快速的裂解样品并释放出基因组DNA，不需要除去蛋白、RNA等，即可将释放出的基因组DNA作为模板直接用于PCR反应。此外，样品使用量少，低至5mg小鼠组织或2-5mm鼠尾即可进行实验。
    本试剂盒中提供的2× Mouse Master Mix具有很强的扩增兼容性，能直接以待测样品裂解液为模板，进行GX特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化操作过程，降低污染几率。
    该试剂盒可用于转基因型鉴定、动物基因分型等。
    产品组分
    类别 编号 组分 产品编号/规格 储存
    10181ES50（50T） 10181ES70（200T）
    Part I 10181-A Buffer MP 5mL 20mL 室温或4℃
    10181-B Protease Plus 220μL 880μL 4℃
    10181-C 6× DNA Loading Buffera 375μL 1.5mL 4℃或-20℃
    Part II 10181-D 2× Mouse Master Mixb 500μL 2× 1mL -20℃
    a）6× DNA Loading buffer：不含SDS。
    b）2× Mouse Master Mix：包含Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等。
    运输方法
    冰袋运输。
    保存方法
    1. 试剂10181-A【Buffer MP】，在常温干燥条件下，可保存12个月，如需保存更长时间可置于4℃。低温保存，易出现沉淀，可平衡至室温或37℃水浴10min，待沉淀溶解后，混匀使用。
    2. 试剂10181-B【Protease Plus】，具有独特配方，为保证其更好的活性和稳定性，建议4℃保存，切勿置于-20℃。
    3. 试剂10181-C【6×DNA Loading Buffer】，可置于4℃或-20℃长期保存。
    4. 试剂10181-D【2× Mouse Master Mix】，-20℃保存，避免反复冻融。
    操作方法
    样品基因组DNA释放
    1. 在离心管中加入100μL Buffer MP，4μL Protease Plus，轻轻涡旋混匀。
    【注】：Buffer MP与Protease Plus混合后尽快使用，不宜长期保存。


    2. 取5-10mg动物组织或2-5mm鼠尾，置于上述离心管中，轻轻涡旋混匀。
    【注】：组织应尽量剪碎，以便酶解反应更顺利进行。
    3. 65℃孵育10-30min，然后95℃处理5min。
    【注】：65℃孵育，一般10min即可满足多数PCR需求。若需要的DNA量较大或样品较难酶解，可将时间延长至30min。组织块不需完全酶解，残余的部分在后续离心步骤中可被除去。
    4. 12000rpm离心5min。
    5. 将上清转移至新的离心管，4℃或-20℃保存或直接用于PCR扩增。
    PCR反应鉴定——PCR反应体系
    组分 体积（μL） 体积（μL） 终浓度
    ddH2O To 20 To 50 -
    2× Mouse Master Mix 10 25 1×
    Forward Primer (10μM) 0.5 1 0.2-0.25μM
    Reverse Primer (10μM) 0.5 1 0.2-0.25μM
    裂解产物（DNA模板） 2 5 -
    【注】：各组分使用前应充分混匀。
    a）模板使用量：建议1-10%总体系。避免超过总体系的20%。
    b）引物终浓度：0.2-0.25μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可在0.1-0.5μM范围内调整引物浓度。
    c）反应体系：推荐使用20μL或50μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
    d）体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。
    PCR反应鉴定——PCR反应条件
    循环步骤 温度 时间 循环数
    预变性 94℃ 3min 1
    变性 94℃ 10sec 30-40
    退火 50-65℃ 20sec
    延伸 72℃ 30sec/kb
    终延伸 72℃ 5min 1
    【注】：a）退火温度：请参考引物的理论Tm值，退火温度可设置低于引物理论值2-5℃。
    b）延伸时间：按30sec/kb设定，如不足30sec，设置30sec即可。
    c）扩增循环数：35个循环已可以扩增足量产物。太多的循环将会导致非特异性扩增增加。
    对照反应
    在PCR结果分析时，不管是阳性结果或阴性结果，如果没有对照反应，都不能确定结果是否可靠。为了便于后续实验结果的分析，建议在进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。
    注意事项
    1. 为了避免样本间交叉污染，每次取样后都需要将取样器材的刃口或与样本直接接触的部位浸入2%次氯酸钠溶液中，反复洗刷数次进行清洗，然后用干净的纸巾擦干残余液体后再进行使用。为了试验方便，也可准备多个取样器材，在使用完后进行统一清洗，确保每一单独样本均使用的是无污染的取样器材。
    2. 建议使用新鲜采取的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。
    3. 试剂Buffer MP若低温保存，易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间，也可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀，混匀后再使用。
    4. 电泳检测时，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则，电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带，影响实验结果。
    5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
    常见问题与解决方法
    常见问题 可能原因 解决方法
    阳性对照、待测样本均无条带。 PCR反应体系或反应条件不合适。 使用梯度PCR摸索PCRZJ反应条件。
    PCR试剂保存不当失去活性。 2× PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。
    引物设计问题。 尝试重新设计引物进行检查。
    阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。 不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。 使用新鲜的试剂。
    加入组织裂解液过量。 增大反应体系，或减少裂解液的用量。
    样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。 裂解混合液液可在4℃保存2-3天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。
    模板加入量不适合。 在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时，可以降模板浓度调节到低于10%的范围。
    PCR循环数不足。 增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。
    非特异性扩增 PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高。 增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。
    PCR引物错配。 重新设计PCR引物。
    配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应。
    阴性对照出现目的条带 操作工具或试剂污染。 实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。
    样本间交叉污染。 每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。
    温馨提示：不可用于临床ZL。
    • 信息声明：本产品供应信息由仪器网为您整合，供应商为（上海高创化学科技有限公司），内容包括 （Mouse Tissue Direct PCR Kit 小鼠组织直接PCR试剂盒）的品牌、型号、技术参数、详细介绍等；如果您想了解更多关于 （Mouse Tissue Direct PCR Kit 小鼠组织直接PCR试剂盒）的信息，请直接联系供应商，给供应商留言！
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