裂谷热病毒荧光PCR检测试剂盒现货价格
- 品牌:百奥莱博
- 型号:2~8℃
- 产地:北京
- 供应商:北京百奥莱博科技有限公司
- 供应商报价:¥4200 - 5800
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名称:裂谷热病毒荧光PCR检测试剂盒现货价格
品Pai:百奥莱博
等级:科研试剂
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·嗜肺军团菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA045
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
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编号:SYA221
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规格:48次/盒
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编号:SYA049
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
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编号:SYA642
等级:科研实验专用
规格:96次/盒
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编号:SYA281
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·炭疽杆菌(BA)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA499
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、简介
本试剂盒用一对炭疽杆菌特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对炭疽杆菌核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途
该试剂盒适用于检测发病部位新鲜脓液、渗出物,吸入性炭疽的咯痰、呕吐物、肠炭疽的粪便及脑脊液、外周血等样本中炭疽杆菌(BA)DNA,用于炭疽病等疾病的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成(50T/Kit)
组份 数量 规格
BA反应液(BA-qPCR MIX) 1管 1mL/管
核酸提取液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合液(Enzymes MIX) 1管 50μL/管
阴性对照(NTC) 1管 250μL/管
BA阳性对照(BA-PTC) 1管 50μL/管
四、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列、MJ系列、Roche系列,博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
五、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为12个月。
六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品采集
6.1.1 适用标本类型:新鲜脓液、渗出物、吸入性炭疽的咯痰、呕吐物、肠炭疽的粪便及脑脊液、牛外周血。
6.1.2 标本采集
6.1.2.1 组织:取发病组织约1g,置入1.5mL洁净EP管,立即送检;
6.1.2.2 血液:无菌注射器抽取外周血1-2mL注入EDTA2Na(或柠檬酸*)抗凝管;
6.1.2.3 体液等液体标本:取0.5-1mL左右,置入1.5mL洁净EP管,立即送检;
6.2 样本前处理:
6.2.1 组织:取50mg左右组织用玻璃匀浆器匀浆,匀浆后置于洁净的1.5mL离心管中;
6.2.2 血液样本:直接取200uL抗凝血,转至一洁净的1.5mL离心管中,加入1mL双蒸水,剧烈震荡30s,8000rpm离心5min,弃上清(若沉淀颜色呈红色,请再重复洗涤一次);
6.2.3 粪便等固体标本:挑取米粒大小粪便,放置于0.5mL生理盐水的离心管中,震荡混匀,13000rpm离心2min,弃上清;
6.2.4 液体标本:取适量标本13000rpm离心2min,弃上清。
6.3 DNA提取
6.3.1 对上述处理好的样本加入40uL核酸提取液,100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
6.3.2 DNA的提取也可以采用商业化DNA提取试剂盒。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取4µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议ZH在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BA-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 20µL N×20µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 21µL N×21µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入21μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(BA-PTC)4μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
预变性 1循环 94℃ for 2 min
PCR扩增 40循环 94℃ for 15 sec
55℃ for 30 sec
在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。
八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的ZG点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(BA-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明炭疽杆菌核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明炭疽杆菌核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行炭疽杆菌qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明炭疽杆菌核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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编号:SYA637
等级:科研实验专用
规格:192次/盒
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规格:48次/盒
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编号:SYA180
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
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规格:96次/盒
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编号:SYA537
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
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规格:48次/盒
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规格:48次/盒
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编号:SYA144
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规格:48次/盒
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规格:48次/盒|96次/盒
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等级:科研实验专用
规格:48次/盒
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规格:48次/盒
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规格:48次/盒
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编号:SYA103
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
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编号:SYA125
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、简介:
本试剂盒用一对三日疟原虫特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用荧光PCR 探针技术进行三日疟原虫的检测。
二、用途:
本试剂盒可用于三日疟原虫检测鉴定及突发公共卫生事件的处置,还可用于三日疟原虫的环境监测、卫生检疫及感染的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成:(48T/ Kit)
组份 数量 规格
三日疟原虫荧光PCR 反应液(qPCR MIX) 1管 672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(DNA Polymerase MIX) 1管 48μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
三日疟原虫阳性对照(PTC) 1管 50μL/管
四、荧光PCR 仪器适用范围
ABI系列,Bio-Rad系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
五、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃保存,避免反复冻融,有效期为6个月。
六、实验操作步骤
6.1 标本采集
血液:用一次性无菌5ml注射器抽取疑似人或动物血3-5ml,置于枸橼酸*或EDTA2Na抗凝管中,摇匀送检。
肺脏等组织:取上述组织1g左右,置于1.5ml洁净EP管中送检。
乳液、体液等标本:取相应标本3-5ml,转至1.5ml洁净EP管中送检。
6.2 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的(DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
血液样本:直接取200μl 抗凝血,转至一洁净的1.5ml 离心管中,加入1ml 双蒸水,剧烈震荡30s,8000rpm 离心5min,弃上清,至无明显红色沉淀。(若沉淀明显,请再重复上述步骤一次)。加入1ml生理盐水,剧烈震荡15s,13000rpm 离心5min,弃上清。沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀,100℃恒温10min,13000rpm 离心3min,取上清4μl 进行PCR 反应。
肺、淋巴结等固体组织:剪取约0.1g 组织,用生理盐水洗去血污,剪碎加入0.5mL TE 转移到匀浆器中匀浆。将匀浆液50μl 转移到1.5mL 离心管中,加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀,100℃恒温10min,13000rpm 离心3min,取上清4μl 进行PCR 反应。
乳液等液体标本:取标本2-3mL,13000rpm 离心3min,弃上清,沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀,100℃恒温10min,13000rpm 离心3min,取上清4μl进行PCR反应。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议ZH在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 PCR 扩增
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(三日疟原虫-qPCR MIX)、酶混合物(DNA Polymerase MIX),室温融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR 反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的ZG点为准。
8.2 试验成立判定
阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
阳性对照(PTC):均产生扩增曲线。
以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明三日疟原虫核酸阳性。
Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明三日疟原虫核酸阴性。
如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行三日疟原虫real time PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明三日疟原虫核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3)PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等),防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。.jpg)
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