实时荧光定量PCR服务

实时荧光定量PCR
技术服务信息
服务名称：实时荧光定量PCR
允许参观：允许参与实验
所在区域：南京栖霞区
服务商：南京中科拜尔医学技术有限公司
使用范围：仅限科研使用，不能应用于临床　
相对定量(mRNA表达量分析)：基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和内参基因同时分别进行定量，然后求出对于内参基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较，可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。内参基因通常选用表达量相对恒定的HousekeepingGene，如：GAPDH、β-actin等。通过同时对内参基因的实时检测，可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正，达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积累，因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
服务内容
  以荧光定量PCR方法对样本基因表达进行相对定量。
样品要求
  客户需提供组织、细胞、血液等样品材料，或纯化好的总RNA或总DNA，反转录好的cDNA样品，具体要求如下：
 

材料种类	样品要求	起始量
血液	新鲜血液及抗凝剂处理的全血	1ml
培养细胞	离心收集的细胞	1x107
动物组织	一般材料	100mg
植物	一般材料	100mg
RNA	OD260/OD280在1.9-2.1之间，完整性好	>1ug
DNA	OD260/OD280在1.7-1.9之间，完整性好	>1ug
cDNA	内参基因检测成功	>20ul

终产品
  目的基因剩余引物(上游引物和下游引物，合成量≥2OD)；目的基因引物序列；相对定量实验报告；剩余探针。
服务说明
  客户提供基因序列。以上报价是以提取的核酸（DNA或cDNA）为起始材料设定的，如果需要进行核酸纯化，费用另计。如因实验材料等非本公司原因造成某实验步骤失败，使实验提前终止，已启动的实验项目仍正常收费。晓劢生物还提供JD定量服务，客户需提供标准品，若需晓劢生物制备标准品，费用另计。