铜绿假单胞菌/肺炎克雷伯菌双重荧光PCR检测试剂盒现货价格
- 品牌:百奥莱博
- 型号:北京百奥莱博科技有限公司
- 产地:北京
- 供应商:北京百奥莱博科技有限公司
- 供应商报价:¥4200 - 5800
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名称:铜绿假单胞菌/肺炎克雷伯菌双重荧光PCR检测试剂盒现货价格
产地:国产|进口
规格:48次/盒
编号:SYA053
等级:科研试剂
品Pai:百奥莱博
一、简介:
本试剂盒采用TaqMan 荧光探针技术,对铜绿假单胞菌/肺炎克雷伯菌中的特异性核酸序列进行扩增并检测,从而判断铜绿假单胞菌/肺炎克雷伯菌的存在。铜绿假单胞菌/肺炎克雷伯菌基因序列设计引物及荧光探针,通过荧光PCR 仪进行扩增检测,从而实现对铜绿假单胞菌/肺炎克雷伯菌的检测。
本试剂盒可在一个反应体系中同时检测和区分铜绿假单胞菌/肺炎克雷伯菌基因,其中肺炎克雷伯菌(Klebsie lla pneumoniae,KP)基因的探针报告基团为FAM,铜绿假单胞菌(Pseudomonas aernginosa,PA)
基因的探针报告基团为ROX。
二、用途:
该试剂盒适合于检测水样粪便、疑似污染物的水、食物等样本中的铜绿假单胞菌/肺炎克雷伯菌,用于铜绿假单胞菌/肺炎克雷伯菌的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
铜绿假单胞菌/肺炎克雷伯菌反应液(PA/KP qPCR MIX) 1管 672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
铜绿假单胞菌/肺炎克雷伯菌阳性对照(PA/KP-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列、MJ系列、Roche系列,博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
六、样品采集与DNA 提取
6.1 样品的采集
6.1.1 食品样品:样品的采集与预培养按照样相关标准要求进行。
6.1.2 粪便样品:取粪便置于灭菌的收集管中送检。
6.1.3 病灶部位样品:取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
注:上述样品建议经过增菌后,收集培养物用于检测。
6.2 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入等体积核酸提取液(固体标本加入50μL核酸提取液),100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议ZH在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂准备
从试剂盒中取出荧光PCR 反应液(qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR 反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(PA/KP-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM和ROX。其中FAM 基团检测KP,ROX基团检测PA。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX 参比荧光。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的ZG点为准。
8.2 试验成立判定
(1)阴性对照(NTC):FAM和ROX通道全部阴性。
(2)阳性对照(PA/KP-PTC):FAM和ROX通道均有扩增曲线。
(3)以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1)FAM通道:Ct值≤35 KP核酸为阳性;Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明KP核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明KP核酸阳性;否则判为样本阴性。
(2)ROX通道:Ct值≤35 PA核酸为阳性;Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明PA核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明PA核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管高压灭菌,而且必须不含RNA 酶。
(3)PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等),防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。.jpg)
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·猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒
编号:SYA629
等级:科研实验专用
规格:192次/盒
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等级:科研实验专用
规格:48次/盒
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编号:SYA080
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
本试剂盒适用于增菌培养物、疑似病料及食品中大肠杆菌O157的检测,其检测结果仅供参考。
出血性大肠杆菌(EHEC O157)可引起人的出血性腹泻和肠炎的大肠埃希氏菌,引发人类、家畜以及野生禽兽不同形式的疾病。本方法为荧光PCR检测方法,反应在同一管内连续进行,操作简单,并有效防止了污染,能对样品中或预培养液中的大肠杆菌O157进行快速检测,具有特异性高、敏感性强和操作简便的特点。O157的探针报告基团为FAM,淬灭基团为None。
试剂盒组成:
| 组份 | 数量 | 规格 |
| 大肠杆菌O157荧光qPCR反应液(O157-qPCR MIX) | 1管 | 720μL/管 |
| DNA抽提液(DNA Extraction) | 2管 | 1.5mL/管 |
| 阴性对照(NTC) | 1管 | 50μL/管 |
| 阳性对照(O157-PTC) | 1管 | 50μL/管 |
| 试剂 | 每个反应加入的量 | N个反应加入的量 |
| 荧光PCR反应液 | 15µL | N×15µL |
| 1循环 | 50℃ for 2 min | |
| 预变性 | 1循环 | 95℃ for 10 min |
| PCR扩增 | 40循环 | 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec |
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