北京现货2×ligation solution MasterMix厂家

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货2×ligation solution MasterMix厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货2×ligation solution MasterMix厂家
编号：RFT108
产地：国产|进口
规格：150μl
品Pai：百奥莱博
2×ligation solution MasterMix是含有T4 DNA Ligase，ligation buffer的2×MasterMix，实验时，只需加入片段和载体即可进行连接反应。适用于DNA片段和载体DNA的连接以及DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。按照10μl连接体系计算，每次使用5μl，可以使用30次。

注意事项
1、2×ligation solution MasterMix由于含有T4 DNA ligase，使用前冰浴中彻底融化，混匀后使用。
2、为了提高转化效率，转化时建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。

使用方法：
一、DNA片段和载体DNA的连接
(1)粘性末端的连接
1．反应体系：

 

	10μl体系	终浓度
线性载体DNA	xμl	10-50 ng
插入DNA片段	yμl	插入片段：载体=1:1-5:1*
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

注意：载体与插入片段的摩尔数比需要优化：一般vector:insert在1:1～1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数：pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如：插入片段2000bp，线性载体为3000bp，如果载体使用量为50ng(0.025pmol)，10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3，则需要2000bp pmol数为0.075pmol，插入片段2000bp的使用量为100ng。
2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：
a.若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后进行电击转化。
b.若要提高转化子数目，可将连接时间延长至1小时。
(2)平末端的连接
1、反应体系：

	10μl体系	终浓度
线性平末端载体DNA*	xμl	10-50 ng
插入DNA片段	yμl	插入片段：载体=1:1-5:1**
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

注意：
a.平滑末端的载体与 DNA 片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，以防止其自身环化。
b.载体与插入片段的摩尔数比需要优化：一般vector:insert在1:1~1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数：pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如：插入片段2000bp，线性载体为3000bp，如果载体使用量为50ng(0.025pmol)，10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3，则需要2000bp pmol数为0.075pmol，插入片段2000bp的使用量为100ng。
2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：
a.若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后才能进行电击转化。
b.若要提高转化子数目，可将连接时间延长至1小时。

二、线性DNA的自身环化
1、反应体系：

	10μl体系	终浓度
线性载体DNA	xμl	10-50 ng
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后才能进行电击转化。

三、接头连接
1、反应体系：

	10μl体系	终浓度
线性DNA	xμl	100-300 ng
磷酸化接头	yμl	0.5-1 μg
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase。连接产物可以直接进行限制性内切酶酶切反应。

储存条件：-20℃

更多有关北京现货2×ligation solution MasterMix厂家的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
罗斯试剂(Rous Reagent)   2×100ml
PC3401 TUREscript One Step RT-PCR Kit(一步法反转录PCR试剂盒)
ARB14224 猪蓝耳病抗体(PRRS-Ab)酶免分析 
4-(二甲*基)*甲醛 2,2-Bis(4-hydroxyphenyl) propane 100-10-7
PY04-001  革兰氏染液  10ml×4支  见使用说明书，用于细菌的革兰氏染色
SJ0325 Glyphosphate 草甘膦
HC0106 单道定时器
8-羟基喹*(代"啉")硫*(代"酸")盐 Ammonium tartrate 134-31-6
5-硝基邻菲啰啉 F6P 4199-88-6
磷酸*二*-柠檬酸缓冲液(pH2.2-8.0)   500ml
BTN131064 细胞表面蛋白分离试剂盒 Bacterial Surface Protein Isolation Kit
ARB12513 大鼠载脂蛋白E(Apo-E)酶免分析 Rat apolipoprotein e,apo-e ELISA KIT
ARB12424 大鼠树突状细胞表面特异性C型凝集素-细胞间黏附分子3结合非整合素分子(DC-SIGN/CD209)酶标法分析 Rat dc specific intercellular adhesion molecule 3-grabbing nonintegrin,dc-sign/cd209 ELISA KIT
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·Western及IP细胞裂解液
编号：RFT157
英文名称：Cell lysis buffer for Western and IP
规格：100ml
本产品是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀和免疫共沉淀。Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mMTris (pH7.5)，150mMNaCl，1% Triton X-100，以及sodiu*(代"m") pyrophosphate，β-glycerophosphate，EDTA，Na3VO4，leupeptin等多种YZ剂。可以有效YZ蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用方法：
对于培养细胞样品：

1、融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的ZZ浓度为1mM。
2.1、对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
2.2、对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
3、充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。

对于组织样品：
1、把组织剪切成细小的碎片。
2、融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的ZZ浓度为1mM。
3、按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4、用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5、充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注意事项：
1、为取得ZJ的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2、需自备PMSF。
3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

储存条件：-20℃，有效期12个月。


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L-羟基脯*酸 Gatifloxacin 51-35-4
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ARB12712 大鼠磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)代做ELISA实验 Rat phospho-extracellular signal-regulated kinase,perk ELISA KIT
87-79-6 L-山梨糖
阿维菌素 Oligomycin 71751-41-2
ARB12822 小鼠三碘甲状腺原*酸(T3)尿液中含量检测 Mouse tri-iodothyronine,t3 ELISA KIT
鞭毛染色液(改良Ryu法)   50ml|100ml
CYB162023 兔抗鸡IgG(抗血清) 0.5ml
BTN70701 柱式病毒DNAOUT Column Viral DNAOUT
BTN130824 冷启动核酸酶 Cold-active Nuclease
BFD028 呋*(代"喃")它酮快速检测试剂盒

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