革兰氏阳性菌DNA提取试剂盒(Southern级)(国产,进口)

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

革兰氏阳性菌DNA提取试剂盒(Southern级)(国产,进口)是高品质的DNA纯化产品，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多革兰氏阳性菌DNA提取试剂盒(Southern级)等DNA纯化产品请联系我司咨询订购。

名称：革兰氏阳性菌DNA提取试剂盒(Southern级)(国产,进口)
品Pai：百奥莱博
编号：BTN130951
英文名：Gram positive bacteria DNA extraction kit(Southern Grade)
产地：国产|进口
规格：10次

除革兰氏阳性菌DNA提取试剂盒(Southern级)(国产,进口)外，我公司正在打折促销以下产品：

·通用酶缓冲液
编号：BTN131180
英文名称：Universal Enzyme Buffer
规格：1mL
本产品是通用的工具酶缓冲液，跟常见的各种分子生物学工具酶兼容，免去试验中更换缓冲液的麻烦。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞
编号：BTN140378
英文名称：E.coli BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL Chemical Competent Cell
规格：10*100μl
本产品来源于Stratagene公司的BL21-Gold菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，从而减少对重组蛋白的降解，补充大肠杆菌缺乏的4 种稀有密码子(AGA、AUA、CCC、CUA)对应的tRNA(argU、ileY、proL、leuW)，提高外源基因，尤其是富含AT-或GC-的真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3 区(DE3 区含有T7 噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，同时具有四环素，*霉素，链霉素，壮观霉素抗性。本产品由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。
菌株基因型为：F- ompT hsdS(rB-mB-)dcm+ Tetr galλ(DE3)endA Hte [argU proLCamr] [argU ileY leuW Strep/Specr]。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μl感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm ，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
4. 诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM 均可)。
5. 为获得需要量的蛋白，ZJ诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。


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·DNA粘转平试剂盒
编号：BTN60107
英文名称：DNA Polishing Kit
规格：20次
本产品利用Pfu DNA polymerase所具有3´到5´的聚合酶活性和5´到3´外切酶活性，将3´或5´突出的DNA片段转化成平末端，用于克隆工作。

产品特点：
1. 简单，精心优化过的2×Polishing Buffer中含有所需要的所有成分，不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA载体。

产品组成：

 

成分	规格
Pfu DNA Polymerase(3U/μL)	20μl
2×Polishing Buffer	0.5ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

使用方法：

1. DNA片段的准备：
无论是来源Taq，Tth,T7，Klenow和Vent等DNA聚合酶合成的DNA片段，还是用限制性内切酶制备的DNA片段，粘转平之前均需要将DNA沉淀以便去除反应液中的无关成份。沉淀DNA的方法包括经典的盐/纯沉淀法，离心柱DNA 吸附法和百奥莱博的一管式非醇超快DNA沉淀法。
2. 设置粘转平(Polishing)反应：

在一个干净的离心管中，分别加入
3´或5´突出的DNA片段	10-500ng
2×Polishing Buffer	25μL
Pfu DNA polymerase	1μL
补水到	50μL
72℃保温2小时。

注意：如果不使用热盖式PCR 仪器加热，则需要在反应管中再加入适量液体石蜡以防反应过程中水份蒸发。
3.反应后处理
粘转平反应后，样品可以放-20℃长期保存，也可以直接用于T4 DNA连接酶催化的连接反应。对10μL的连接反应体系，一般需要加入1-2μL粘转平反应液。由于Pfu DNA polymerase在连接反应的温度条件下几乎没有活性，所以不必去除。但文献报道，去除后连接效率更高。


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·哺乳动物专用蛋白酶YZ剂
编号：BTN130527
英文名称：Protease Inhibitor for Mammal
规格：1mL
本产品为哺乳动物蛋白酶YZ混合液，溶剂为DMSO。专门用于裂解哺乳动物组织(如，血液、肝脏、肌肉等)时，YZ各种内源和外源蛋白酶活性，防止蛋白质降解。本产品YZ谱广，能特异性YZ丝*酸蛋白酶、半胱*酸蛋白酶、天门冬*酸蛋白酶和*基肽酶等各种蛋白酶活性。与各种细菌细胞裂解液兼容，在裂解液中加入1/100体积即可。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期两年。

·柱式真菌DNA提取试剂盒
编号：BTN70901
英文名称：Fungus DNA Column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是真菌DNA提取试剂盒的柱式升级产品，能够破裂各种真菌坚硬的外壳，同时使用硅胶膜DNA 纯化技术，得到的DNA适用于各种后续实验。

试剂盒特点：
1. DNA 纯净，OD260/280一般都在1.9左右、DNA片段大小在30-50 Kb左右，可直接用于PCR、酶切、杂交等。
2. 操作简单，整个过程约15分钟，比大多数同类产品短。
3. 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。
4.液体培养物处理量在0.1-3mL之间，真菌菌丝、孢子、子实体的处理量在0.1-0.5g之间。
5. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1. 称取0.1-0.5g 湿的真菌菌丝、孢子、子实体或0.1-3mL液体培养物离心得到的沉淀，转移到塑料研钵中，液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。
 注意：避免使用含二氧化硅的玻璃研钵，因为DNA 会吸附在表面，影响得率。如果菌丝或子实体等已经十分干燥，则使用量比上面推荐的使用量低5-10倍；如果需要预先从环境中对真菌进行纯化(如从血液病原真菌中提取DNA，则需要先去除红细胞等成份，具体方法请参考相关文献和相关产品的使用说明书，如红细胞裂解液)。
2.在离心管中加入1mL 65℃预热的溶液A并用移液枪头充分吹打混匀(如果溶液A有沉淀，需先在65℃加热溶解后摇匀再使用)。
3. 65℃保温5-30分钟，其间吹打混匀2-3次。
4. 12000～15000g室温离心3分钟。
5. 将不超过0.75mL的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物，但对后续操作没有影响，不必进行特殊处理。
6.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色混浊状。
7. 将其置于冰浴中放置5-10分钟。
8. 12000～15000g室温离心3分钟，转移上清到新的1.5mL塑料离心管中。
9. 加入0.2mL的*仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。
10. 12000～15000g室温离心3分钟，两相交界面将有白色膜状物，小心转移上清到新1.5-5mL塑料离心管中。注意：由于下一步要加1.5倍体积的溶液C，所以新的离心管的体积要足够大。
11. 加入1.5倍体积的溶液C，上下颠倒30秒混匀，然后分多次的将混合液转移到离心吸附柱中。
12. 每次转移0.7-0.8mL 混合液后，室温放置5-10分钟。
13. 12000～15000g室温1分钟，弃穿透液。
14. 对需要多次上柱的样品，可以在此将剩余的样品加到离心吸附柱式中，重复第12-14 步的操作。
15. 将0.7mL 通用洗柱液加入离心柱，室温离心1分钟，弃穿透液。
16.在离心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液，12000～15000g离心半分钟(此步为第二次洗涤)。
17. 空甩1分钟去除残留液体。
18. 将离心柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中，加入30-100μL通用洗脱液。
19.室温放置5分钟后离心1分钟，管底即为真菌DNA溶液，可立即使用，也可长期保存在－20℃。
20.可以重复上步一次，以洗脱更多的DNA。

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