His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶)促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶)促销，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶)促销
编号：BTN100102B
规格：2mL
品Pai：百奥莱博
本产品基于His-Ni亲和层析的蛋白质纯化方法是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法，本产品就是专门用于上述实验的一站式产品。

产品特点：
1.一站式套装，含所需的介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达His蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的His-标记蛋白。
3.变性和非变性条件均可使用，也适用于纯化包涵体中的His标记蛋白。
4. 每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供4mL浓度为50%的Ni-Agarose介质，其ZD载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质。
6. 介质为CL-6B琼脂糖，含四个Ni离子螯合基团，比只有四个Ni离子螯合基团的Ni-IDA更有效。
7. 本介质可以反复使用多次。
试剂盒组成：

 

成份	规格
Ni-Agarose介质，50%	4mL
1M咪唑溶液	25mL
1M Tris-HCl pH7.9	25mL
5M NaCl溶液	25mL
溶菌酶(20 KU/mg)	30mg(A型无)
Benzonase(2U/μL)	20μL(A型无)
盐*(代"酸")胍	6g
尿素	20g
PMSF(10mg/mL)	0.5mL
亲和层析柱，6mL	1套
使用手册	1份

储存条件：常温运输和保存，但介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF需-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：去离子水、20%乙醇、0.45μm滤膜

使用方法：
1．将Ni-Agarose介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据His蛋白产量决定，其ZD载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质，请根据实验需要取适量的Ni-Agarose介质加入层析柱)。
2．用5倍柱体积(指填料的体积，下同)自备去离子水洗柱，共三次。
3．用5倍柱体积的新配结合液洗柱(配方如下，以10mL为例)，共三次：

成分	用量	在结合缓冲液中浓度
1M Tri-HCl(pH7.9)	0.2mL	20mM
1M咪唑溶液	0.1mL	10mM
5M NaCl溶液	1mL	500mM
自备去离子水	8.7mL	-

4．室温5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清，沉淀(约100mg)放冰上待用或放-80℃保存。用不加诱导物的菌液做对照样。
5．如果用本产品A型：加入1mL冰浴的结合液(1mL菌液需要用50μL结合液)，再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。如果用本产品B型：加入1mL冰浴的含溶菌酶的结合液(先取20mL结合液，加入所有30mg溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，剩余的-20℃放置)，再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液和1μL Benzonase，冰上放置30分钟。
6．4℃下13000-15000g离心10分钟，去除残留细胞和细胞碎片以防堵柱，收集上清，留样做SDS-PAGE电泳对照。如果要纯化裂解液中可溶部分的His标记蛋白，则直接进入第7步；如果要纯化裂解液中包涵体(沉淀部分)中的His标记蛋白，则直接进入第12步。

A、纯化细胞裂解液中可溶部分的His标记蛋白
7．将上步得到的上清液上柱，让重力使裂解液自然流出。如要提高His标记蛋白与介质的结合效率，可用试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。
8．用10倍柱体积结合液洗柱(配方见上表)，收集并保存穿透液(含杂质或没被吸附的His标记蛋白，可做SDS-PAGE电泳的对照)。
9．如果用一步式洗脱法(适合已经找到ZJ咪唑浓度的情况)，则直接用适量的新鲜配制的洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含His标记蛋白)。洗脱液的配方如下(以1mL体积和ZJ咪唑浓度是500mM为例)：

成分	用量	在洗脱液中的浓度
1M Tri-HCl(pH7.9)	20μL	20mM
1M咪唑溶液	500μL	500mM
5M NaCl溶液	100μL	500mM
自备去离子水	380μL	-

10．如果用多步式洗脱(适合不知道ZJ咪唑浓度或一步式洗脱杂质多的情况)，则按上表配制一系列咪唑浓度不同(如40、60、100、200、300和500mM)，其他成分浓度不变的洗液，按从低到高的顺序洗涤并收集样品，SDS-PAGE电泳检测His标记蛋白所在的区域。
11．洗脱后，依次使用10倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没)，ZH堵住层析柱下端的漏口，4℃保存待下次使用。

B、纯化包涵体中His标记蛋白
12．将第6步离心得到的包涵体沉淀重悬于1-3mL含盐*(代"酸")胍结合液中或1-3mL含尿素结合液中(建议优先使用尿素做变性剂，因为得到的洗脱液可以直接跑SDS-PAGE，而用盐*(代"酸")胍的洗脱液需先除盐后才能电泳)。冰浴1小时以使包涵体溶解，期间可轻柔摇晃几次。含变性剂的结合液配方如下(以10mL为例)：

成分	含盐*(代"酸")胍结合液	含尿素结合液
1M Tri-HCl(pH7.9)	200μL	200μL
5M NaCl溶液	1mL	1mL
盐*(代"酸")胍(MW=95.6)	5.7g	无
尿素(MW=60.1)	无	4.8g
自备去离子水	加水到10mL	加水到10mL

13．室温10000×g离心20分钟，沉淀为未溶解的包涵体。将上清(含溶解后的His标记蛋白)以自备的0.45μm滤膜过滤。
14．将滤过液上柱，后续纯化步骤同第7-第11步。只是所用结合液和洗脱液均含变性剂，含变性剂的洗脱液配方见下表(以1mL为例)：

成分	含盐*(代"酸")胍洗脱液	含尿素洗脱液
1M Tri-HCl(pH7.9)	20μL	20μL
1M咪唑溶液	500μL	500μL
5M　NaCl溶液	100μL	100μL
盐*(代"酸")胍(MW=95.6)	0.57g	无
尿素(MW=60.1)	无	0.48g
自备去离子水	补水到1mL	补水到1mL

注意事项：整个实验需避免含巯基乙醇、DTT和EDTA等成分。若洗脱液不能将His标记蛋白洗脱下来，可改用pH6.5- 4.5的pH递减的Tris-HCl洗脱。

关于His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶)促销的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
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DN3601 尿液基因组DNA快速提取试剂盒
BTN130423 Q交换介质 Q Medium
新型隐球菌染色液   20ml
F050303 人IgM抗体 Human IgM
固蓝B盐 BBIH 14263-94-6
ARB13062 小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)elisa检测说明书 Mouse pituitary adenylate cyclase activating polyPeptide,pacap ELISA KIT
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组织胍溶液(5mol/L,RNase free)   100ml
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·柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒
编号：BTN70703
英文名称：Mycobacteria DNA column extraction kit
规格：50次
分枝杆菌属(Mycobacterium)是极为古老的细菌，与人类的疾病相关的就有25种以上，包括引起结核病的结核分枝杆菌(Mycobacteria tubercμLosis)。近年来由于多重耐药性分枝杆菌的出现，分枝杆菌再次成为人们关心的细菌。PCR快速诊断是目前检测分枝杆菌的主流方法，但由于此类细菌具有十分独特的坚硬的细胞壁，快速提取其基因组DNA一直是十分棘手的技术问题。本产品就是为解决这一问题而开发。

试剂盒特点：
1. 操作简单，客户不需要准备额外的试剂。
2. PCR检测灵敏度一般在10-100CFU/mL样品。
3. 既可以使用培养的细菌，也可以使用痰液、精液、血液、脑脊液等样品。
4. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。
5. 安全无毒，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。

试剂盒组成：

成分	规格
化痰液	100ml
溶液A	7.5ml
溶液B	15ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
注意：文献报道部分分枝杆菌在DNA提取过程中还有形成菌落的能力，所以任何丢弃的溶液都必须按有传染性的污染物品对待，并严格按有关部门要求进行消毒处理。

一:培养的分枝杆菌样品的预处理
1. 刮取培养的分枝杆菌到0.5mL自备TE缓冲液中。
2. 80℃放置20分钟以杀灭细菌。
3. 3000 g室温离心15分钟，弃上清。
4.细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组DNA提取步骤。
二:含分枝杆菌的痰液样品的预处理
1. 将需要处理的痰液样品加入到干净的10mL或15mL塑料离心管中。
2. 加入等体积的化痰液，充分混合均匀后室温放置15-30分钟。如果痰很浓，可以延长保温时间。
3. 3000 g室温离心15分钟，弃上清。
4.细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组DNA提取步骤。
三:含分枝杆菌的血液样品的预处理
1. 用自备红细胞裂解液对血液进行红细胞裂解处理，具体操作见百奥莱博红细胞裂解液(BTN60403)使用手册。
2. 将得到的白细胞沉淀-20℃或更低温度放置10分钟。
3. 迅速将得到的白细胞沉淀100℃加热10分钟。
4.上述处理将使大部分白细胞破裂，加入自备的TE或PBS缓冲液,直到离心管体积的一半位置。此步使白细胞的DNA进入缓冲液中。
5.离心5-10分钟沉淀细菌，离心速度取决于离心管的大小。如果样品在1.5mL离心管，则可以12000～15000g室温离心。如果样品在10-15mL离心管，则3000-5000g室温离心。
6. 吸弃上清(含白细胞DNA)后所得细菌沉淀可以放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组DNA提取步骤。
四:细菌基因组DNA的提取
1. 将150μl 65℃预热过的溶液A加到有细菌沉淀的离心管中，充分震荡混匀。
2. 将细菌和溶液A的混合物转移到一个干净的1.5mL塑料螺旋盖离心管中。强烈建议不要使用压盖式塑料离心管，否则后面处理过程中溶液容易漏出。
3. 加入300μl溶液B和300μl自备*仿，充分震荡混匀。
4. -20℃放置直到液体凝固，一般需要20-60分钟。过夜放置也可。
5. 放室温融化后振荡半分钟。
6. 12000～15000g室温离心3～5分钟，小心转移上清到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
7. 12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 加入0.5mL通用洗柱液 12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 重复第8步的洗涤过程一次。
10. 短暂离心半分钟。此步不要省略，否则残留的洗柱液(含乙醇)将会影响DNA电泳、酶切和PCR等反应。
11. 将离心吸附柱转移到一新的离心管中，加入30-100μL DNA洗脱液2.0，12000～15000g室温离心半分钟，所得溶液即基因组DNA。


His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶)促销关键词：His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶),One-Stop His-Tagged Protein Miniprep Pack(B),BTN100102B


·一管式病毒RNA提取试剂盒
编号：BTN3073
英文名称：One-tube virus RNA extraction kit
规格：100次
本试剂盒是专用于血清(血浆)等液体样品中提取病毒RNA的纯化试剂。本产品回收率极高,尤其适合于整合到临床RT-PCR检测试剂盒中。且能用于提取其他液体样品和微量样品。

产品特点：
1. 回收率达到90%以上，高于绝大部分基于离心柱的提取方法。
2. 灵敏度高，RT-PCR检测到的ZZ灵敏度可以达到50-100拷贝/mL(对HIV和HCV)。
3.一管式操作，不使用离心柱，整个操作过程均在室温下完成。
4. 无毒环保，不需要使用*酚和*仿等有毒的有机溶液。
5.可放量，如果加上病毒离心富集步骤，每管最多可以处理样品1.5mL。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	30ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：准备工作
1. 血浆的抗凝剂必须是EDTA或ACD，不能是肝素。使用ACD时由于所加入ACD会增加体积，样品会被稀释，得到的病毒滴度会比使用EDTA低15%左右。
2. 用于制备血浆的全血在2-25℃放置的时间不能超过6小时，在此时间内，可以室温800-1600g离心20分钟，上清即为血浆。
3. 血浆可以在2-8℃或更低温度下运输，可以在室温放置一天，2-8℃放置5天，-20℃以下长期保存。
4. 血浆按0.6mL/管的量分装保存，以避免反复冻融。
5. 实验前所有试都必须放置在室温。
6. 实验当天新鲜配制70%的乙醇。

二：病毒提取操作
1. 标记1.5-2mL螺旋盖塑料离心管(如Sarstedt CAT#:782.694.006)，为避免污染，建议不要使用压盖式塑料离心管。注意设置阳性和阴性对照。
2. 每管(包括正负对照管)中加入0.6mL病毒RNA提取试剂盒溶液(需提前融化)。
3.快速震荡样品几秒，再短暂离心，取0.2mL液体样品加入到已经装有0.6mL病毒RNA提取试剂盒溶液的管中。如果病毒需要富集，可以将1.5mL液体样品在4℃ 24,000 g冷冻离心60分钟，移弃1.3mL上清后在取用样品。
4.在正负对照样品管中分别加正负对照样品。
5.室温放置10分钟。此间可以在每个管上做个标记，以在下步区别向心面和离心面。
6. 振荡数秒后加入0.7mL室温异丙醇，旋紧盖后振荡30秒混匀，把离心管的向心面对向转头的ZY，13,000-15000g室温离心至少15分钟。
7.小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀(此时可能看不见)。
8. 加入1.0mL室温70%乙醇，振荡数秒后 15000g室温离心5分钟。注意：在离心机中放置离心管时将其向心面对向转头的ZY。
9.小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀(此时呈膜状沉淀)。
10. 再短暂离心数秒，用移液器移弃残留液体(70%乙醇)，否则它会影响后续反应。
11. 加入200μl RNase-free水或百奥莱博的1×液相RNase Scavenger(能灭活残留的RNase，而RNase-free水无此功能)，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状RNA沉淀，溶液将呈混浊状,含少量不溶物。由于不溶沉淀物中含有RNA，所以不要离心后取上清使用，必须取混合液使用，哪怕很浑浊。
12. 直接取适量用于RT-PCR，如果溶于200μl水,同时样品使用量不超过RT-PCR体系的1/2，不溶物一般不会影响RT-PCR。剩余样品可以室温放置2小时，也可保存于-80℃保存一个月。

疑难解答：
Q：提取液体样品/病毒核酸(RNA或DNA)为何很难？
A：原因一是量少。病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存，每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万个RNA分子)，同时其长度也十分有限(是细胞基因组的万分之一以下)，样品中病毒数往往也不是很多，使得样品中核酸的JD量几乎是微乎其微，十分容易丢失。另外，由于得到的核酸量少，不能使用电泳和测OD检测，只能通过PCR或RT-PCR检测，而病毒RNA往往具有稳定的二级结构，进一步增加了鉴定的难度(即不知道是RNA提取的问题还是RT-PCR的问题)。
Q：如何判断是病毒RNA没提取出来还是提取出来了但没有RT-PCR成功？
A：在RT-PCR反应中加阳性和阴性对照。

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