人尿游离皮质醇检测试剂盒辣根过氧化物酶底物ABTS水溶性HRP底物，在过氧化物酶的作用下产生绿色终产物。该绿色产物在410nm及650nm具有两个主要的吸收峰。OPD和HRP反应时生成桔黄色的产物，在492nm时吸收Z大。OPD易溶于底物缓冲液，如Stable Peroxidase Substrate Buffer。
TMB被过氧化氢氧化时（由HRP催化）可形成蓝色产物，主要吸收峰在370 nm和652nm。加入硫酸或磷酸后，它会变成黄色，Z大吸收峰为450 nm。TMB灵敏度很高，达到相同的检测灵敏度需要的量比ABTS少，但这也可能产生较高的背景，所以要求使用较少的蛋白或较低的抗体浓度。
人尿游离皮质醇检测试剂盒空白和对照的设置：
空白1：不加抗原，只加包被液。（检测一抗的非特异性吸附）
空白2：不加一抗，用稀释液代替。（检测二抗的非特异性吸附）
阴性对照：不加一抗，用免疫前血清代替。
结果判定：
标本/阴性对照比值：在得出标本（S）和阴性对照（N）的A值后，计算S/N值。（S＝样品OD-空白OD，N＝阴性对照OD-空白OD）
P/N > 2的判为阳性，人尿游离皮质醇检测试剂盒颜色淡的阳性孔的稀释倍数即为抗体的效价。
空白对照一个是包被空白，只加包被液，不加抗原，这是检测一抗 的非特异性吸附的。空白2也很合理，不过阴性对照的血清，准备用多大稀释度的？人尿游离皮质醇检测试剂盒这个要做几个稀释度，那个浓度的非特异性媳吸附Z小，就固定用那个浓度。
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