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名称:北京裂谷热病毒荧光PCR检测试剂盒价格厂家
规格:48次/盒
编号:SYA233
产地:国产|进口
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·超广谱β-内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA051
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·对虾白斑病毒(WSSV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA513
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
本试剂盒适合于检测对虾样品按不同的大小或感染期取不同组织样品等样本中的对虾白斑病毒(WSSV),用于对虾白斑病毒(WSSV)感染的辅助诊断,其检测结果仅供参考。
本试剂盒用一对对虾白斑病毒特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对对虾白斑病毒DNA进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染动物的病原学诊断。
试剂盒组成:
| 组份 | 数量 | 规格 |
| WSSV反应液(WSSV-qPCR MIX) | 1管 | 672μL/管 |
| DNA抽提液(DNA Extraction) | 2管 | 1.5mL/管 |
| 酶混合物(Enzymes MIX) | 1管 | 48μL/管 |
| 阴性对照(NTC) | 1管 | 50μL/管 |
| WSSV阳性对照(WSSV-PTC) | 1管 | 50μL/管 |
储存条件:-20℃,有效期6个月。
使用方法:一、样品采集及前处理:
对虾样品按不同的大小或感染期取不同组织样品0.1g左右,其中,对虾幼体、仔虾取完整个体,3cm以下的幼虾取摘除虾眼的头胸部,较大的幼虾可取腮区或数根腮丝,成虾取1-2根腮丝或自心脏或腹部血窦抽取血淋巴,怀疑为慢性感染的较大幼虾或成虾取淋巴器官。如果2h以后才能处理,宜将样本保存于无水乙醇中。非对虾的甲壳类动物参照对虾的方法取样。非生物样品,取0.1-0.5g。
手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中。
二、
DNA提取:可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套),并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入等体积核酸提取液(固体标本加入50μL核酸提取液),100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议ZH在样品制备区域加入阳性对照。
三、
检测步骤:1.
试剂的准备从试剂盒中取出荧光PCR反应液(WSSV-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
| 试剂 | 每个反应加入的量 | N个反应加入的量 |
| 荧光PCR反应液 | 14µL | N×14µL |
| 酶混合液 | 1µL | N×1µL |
| 总量 | 15µL | N×15µL |
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(WSSV-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
2.
qPCR反应条件将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
| | 1循环 | 50℃ for 2 min |
| 预变性 | 1循环 | 95℃ for 10 min |
| PCR扩增 | 40循环 | 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec |
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
四、
结果分析:1.
结果分析条件设定直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的ZG点为准。
2.
试验成立判定➤阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
➤阳性对照(WSSV-PTC):均产生扩增曲线。
➤以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
3.
结果判定➤在试验成立的条件下,Ct值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线,表明WSSV核酸阳性。
➤Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明WSSV核酸阴性。
➤如果Ct值>35,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
➤对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行WSSV 检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明WSSV核酸阳性;否则判为样本阴性。
五、
注意事项:➤初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
➤所有使用的离心管高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
➤PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
➤样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
➤试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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钨酸 10% Iron chelate 7783-03-1
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甘*酸锌 o-Toluic acid 7214-08-6
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编号:SYA639
等级:科研实验专用
规格:192次/盒
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编号:SYA215
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
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编号:SYA084
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·呼吸道合胞病毒RSVA/RSVB分型双重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA186
英文名称:RSVA/RSVB PCR Detection Kit
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、
简介:本试剂盒用一对呼吸道合胞病毒RSVA型特异性引物,一对呼吸道合胞病毒RSVB型特异性引物,分别结合一条特异性荧光探针,用一步法双重荧光RT-PCR 技术对呼吸道合胞病毒RSVA/RSVB 分型RNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中呼吸道合胞病毒RSVA型的探针报告基团为FAM,呼吸道合胞病毒RSVB 型的探针报告基团为VIC/HEX/JOE。
二、
用途:本试剂盒适用于各种咽拭子、鼻拭子样品等临床样品中呼吸道合胞病毒RSVA/RSVB分型的特异性检测。适用于呼吸道合胞病毒RSVA/RSVB分型感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供临床参考。
三、
试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
呼吸道合胞A/B反应液(RSVA/RSVB-qRT-PCR MIX) 1管 576μL/管
qRT 酶混合物(qRT Enzymes MIX) 1管 192μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
呼吸道合胞A/B 阳性对照(RSVA/RSVB-PTC) 1管 50μL/管
四、
储存条件及有效期:本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、
荧光PCR仪器适用范围:ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、
样品的采集与RNA提取6.1
样品的采集按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-80℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温(22-25℃)放置30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或直接使用水平离心机,3000rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后即可分离出血浆,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品:在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水,剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中,6000rpm离心20s,取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品:称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(置于冰上或加入液氮),再加1mL生理盐水研磨至无块状物,然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2
RNA提取可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取4μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议ZH在样品制备区域加入阳性对照。
七、
检测步骤:7.1
试剂的准备从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(RSVA/RSVB-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 12µL N×12µL
酶混合物 4µL N×4µL
总量 16µL N×16µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm 离心10s,向设定的N个PCR 反应管中分别加入16μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(RSVA/RSVB-PTC)4μL,10000rpm 瞬时离心10秒。
7.2
qRT-PCR反应条件将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 50℃ for 30 min
预变性 1循环 95℃ for 5 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 10 sec
55℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM和VIC(若仪器无VIC通道,可选择HEX或JOE通道)。其中FAM基团检测RSVA,VIC/HEX/JOE基团检测RSVB。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、
结果分析:8.1
结果分析条件设定直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的ZG点为准。
8.2
试验成立判定(1) 阴性对照(NTC):FAM和VIC/HEX/JOE通道均无扩增。
(2) 阳性对照(RSVA/RSVB-PTC):FAM和VIC/HEX/JOE通道均有扩增。
以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效
8.3
结果判定(1) FAM通道:Ct值≤35 RSVA核酸为阳性;Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明RSVA核酸阴性。
Ct值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明RSVA核酸阳性;否则判为样本阴性。
(2) VIC/HEX/JOE通道:Ct值≤35 RSVB核酸为阳性;Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明RSVB核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明RSVB核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、
注意事项:(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管高压灭菌,而且必须不含RNA 酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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温馨提示:不可用于临床ZL。