北京现货miRNA提取试剂盒销售

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖北京现货miRNA提取试剂盒销*(代"售")在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：北京现货miRNA提取试剂盒销*(代"售")
规格：50次
品Pai：百奥莱博
英文名：miRNA Purification Kit
产地：国产|进口
  本试剂盒专用于从各种动物组织、植物组织、细胞、血清、血浆等样本中分离纯化miRNA， 还可以提取siRNA，snRNA等其他小于200nt的小分子RNA，同时也可用于总RNA的提取。本品将酚/胍裂解技术和硅基质膜纯化技术相结合，独特的裂解液在有效YZRNases的同时，可以通过有机抽提的方法除去细胞或组织样品中的大部分DNA和蛋白。对于一些敏感的下游实验中，如需富集miRNA可适用该试剂盒单独对miRNA进行富集。本品适用样本范围广，制备的RNA纯度高，可直接用于敏感的下游应用，如Northern Blot分析，Real-Time PCR，Microarray Analysis等。

试剂盒组成：

 

组份	50次
TRIzon Reagent	60ml
Buffer RWT(浓缩液)	15ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
吸附柱RM及收集管	50套
吸附柱RS及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	50个

保存条件：TRIzon Reagent 2～8℃避光保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂：*仿、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融，否则影响miRNA提取的量和质量。
3、DY次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RWT和Buffer RW2中加入无水乙醇。
4、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤：

方法一：miRNA富集(可直接用于敏感的下游实验)
1、样品处理
①组织：将组织在液氮中磨碎。每30-50 mg组织加1ml TRIzon Reagent，震荡混匀。样品体积不超过TRIzon Reagent体积的十分之一。
②单层培养细胞：吸去培养液，加入TRIzon Reagent，每10cm2加入1ml TRIzon Reagent(裂解液用量视培养瓶面积而定)。
③细胞悬液：离心得到细胞沉淀，弃上清。每5×106-1×107细胞加入1ml TRIzon Reagent(细胞不需洗涤)。
④血浆或血清：取200μl血浆或血清样本，加入5倍体积TRIzon Reagent，震荡混匀30秒。
2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次，使其充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3、可选步骤：4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心5分钟，取上清，转入一个新的离心管(自备)中(如样品中含较多蛋白、脂肪、多糖等，可选做此步骤)。
4、向上清中加入*仿，每使用1ml TRIzon Reagent加入200μl*仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置5分钟。
5、4℃ 12000rpm离心15分钟，样品分为三层：红色有机相，中间层，无色水相，将上层无色水相移到一个新的离心管(自备)中。
6、向步骤5得到的溶液中加入1/3倍体积的无水乙醇， 混匀，将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RM中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱，请分多次转入。12000rpm离心30秒，离心后弃掉吸附柱RM，保留流出液。
7、向步骤6得到的溶液中加入2/3倍体积的无水乙醇，混匀。
8、将上步所得溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RS。若一次不能将全部溶液加入吸附柱，请分多次转入。12000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
9、向吸附柱RS中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心30秒, 倒掉收集管中的废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
10、向吸附柱RS中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
11、重复步骤10。
12、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RS置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤的目的是将吸附柱RS中残留的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
13、将吸附柱RS置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱中间部位加入30-50μlRNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤13。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱RS中，重复步骤13。

方法二：总RNA的提取(提取的总RNA包括miRNA等其他<200 nt的小分子RNA)
1~5步骤同方法一。
6、向步骤5得到的溶液中加入1.25倍体积的无水乙醇，混匀。
7、将上步所得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱RM中，请分多次转入。12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
8、向吸附柱RM中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
9、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
10、重复步骤9。
11、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RM置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤的目的是将吸附柱RM中残留的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱RM转入新的无RNase离心管中，向吸附柱中间部位加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，室温 12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱RM中，重复步骤12。

储存条件：室温(15～30℃)。

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北京现货miRNA提取试剂盒销*(代"售")关键词：WE0195,miRNA提取试剂盒,miRNA Purification Kit

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磷酸*喹 Formamidinium acetate 50-63-5
北京现货miRNA提取试剂盒销*(代"售")关键词：WE0195,miRNA提取试剂盒,miRNA Purification Kit


·酵母质粒提取试剂盒
编号：WE0165
英文名称：Yeast Plasmid Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒在普通碱裂解法的基础上进行了改进，全新的Lyticase可以有效的破除酵母细胞壁，新型硅基质膜和缓冲液系统能GX专一的结合质粒DNA，同时可以ZD限度的去除蛋白及其他杂质，整个过程方便快捷，不需使用有毒有害试剂，可以同时处理多个样品。除适用于酵母细胞外，也可用于大肠杆菌。使用本试剂盒提取的质粒DNA可用于各种分子生物学实验，如连接、转化、测序和文库筛选等。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer P1	15ml
Buffer P2	15ml
Buffer N3	20ml
Buffer PS	15ml
Buffer PB	10ml
Buffer PW(浓缩液)	10ml
Buffer EB	10ml
RNase A(10 mg/ml)	150μl
玻璃珠	2g
吸附柱DM及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇，异丙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，将吸附柱置于2～8℃可保存更长时间，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。
2、DY次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2–8℃保存。
3、DY次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer P2、Buffer N3是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
5、注意不要直接接触Buffer P2和Buffer N3，使用后应立即盖紧盖子。
6、提取的质粒量与酵母菌株、质粒拷贝数、培养条件等因素有关，通常酵母质粒拷贝数都很低，通过电泳或分光光度计法都很难检测到。

操作步骤：
1、取1-5ml酵母培养物(最多不超过5×107个酵母细胞，一般对于酿酒酵母OD600=1.0时，相当于1-2×107细胞/ml)加入离心管(自备)中，12000rpm(~～13400×g)离心30秒，收集菌体沉淀，尽量吸弃上清。
2、向菌体中加入250μl Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，重悬沉淀。
3、在以上混合物中加入40 mg的玻璃珠(Glass Beads)，涡旋震荡10分钟。
4、向离心管中加入250μl Buffer P2，温和地上下颠倒混匀6-8次，室温放置5-10分钟，此时菌液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮，提示可能菌量过大，裂解不彻底，应减少菌体量。
5、向离心管中加入350μl Buffer N3，立即温和地上下颠倒混匀6-8次，此时出现白色絮状沉淀，12000rpm离心20分钟。
注意：Buffer N3加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
6、柱平衡: 向已装入收集管的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、将步骤5所得上清加入到已装入收集管的吸附柱中，注意不要吸出沉淀。
注意：吸附柱的ZD容积为750μl，溶液分2次过柱。
8、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
9、向吸附柱加入150μl Buffer PB，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、向吸附柱中加入750μl Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
11、将吸附柱重新放回收收集管中，12000rpm离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100μl Buffer EB，室温放置数分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意：
1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置数分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时，Buffer EB在65-70℃水浴预热，可以增加提取效率。
3)通常酵母质粒拷贝数很低，通过电泳或者分光光度计法都很难检测到。提取的质粒如果用于下一步实验，通常建议使用量为：用作PCR模板可使用1–5μl质粒，用于转化大肠杆菌可使用5–10μl质粒。
4)转化大肠杆菌时应使用商业化高转化效率的感受态细胞。

储存条件：室温(15～30℃)

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