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磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 DNA纯化

产品信息
  • 特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

    北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 DNA纯化在内的分子生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。


    名称:磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 DNA纯化
    英文名:MagBeads Gel DNA Extraction Kit
    产地:国产|进口
    规格:96次
      本试剂盒提供了一种简单、快速、GX的用于琼脂糖凝胶DNA回收的方法。它可以从用TAE或TBE制成的琼脂糖凝胶中回收100 bp以上的DNA片段,回收效率高达80%。溶胶液将琼脂糖胶溶解后,磁珠选择性的吸附DNA片段。经漂洗后,洗脱得到的DNA纯度良好,可用于测序、酶切、PCR、克隆等下游实验。

    试剂盒组成

     
    组份 96次
    Buffer MG 90ml
    Buffer GW1 52ml
    Buffer GW2 50ml
    Buffer EB 30ml
    Magbeads PN 2×1ml


    自备仪器及试剂
    1、手动单管提取:恒温混匀仪;2/15ml磁力架;异丙醇、无水乙醇
    2、手动96孔深孔板提取:恒温混匀仪;废液抽吸系统;手动连续分液器;电动连续分液器;手动连续分液器分液管(25ml);96孔板磁力架;异丙醇;无水乙醇

    实验前准备及重要注意事项/strong>:
    1、电泳时使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。
    2、切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。
    3、Magbeads严禁冰冻、离心。冰冻和离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。
    4、Magbeads使用前需涡旋震荡20秒使其充分混匀。
    5、如Buffer MG中出现沉淀,请在50℃水浴锅中重新溶解,摇匀后即可使用。
    6、首次使用前应按试剂瓶标签在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇并做好标记。
    7、实验过程中,磁珠在溶液中的充分混匀对于提取的得率与纯度都有很大的影响。实验过程中务必使磁珠与溶液充分混匀。不同厂家生产的恒温混匀仪震荡混匀效果有一定差异,实验过程中请注意观察磁珠状态。如出现磁珠贴壁等未充分混匀的现象,请用移液器吹吸混匀或调整震荡频率。

    操作步骤

    一、手动单管操作:
    1、在长波紫外灯照射下将目的条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量去除多余的琼脂糖凝胶),称重后将其放入干净的1.5ml离心管中。
    2、向离心管中加入3倍胶体积的Buffer MG(如果胶块重0.1 g,其体积为100μl)后,将其放入50℃的水浴锅中孵育10分钟,期间每隔3分钟涡旋震荡5秒钟。
    3、将离心管从水浴锅中取出,检测胶块是否完全融化以及溶液是否由黄色变成紫色(如胶块未完全溶解,将离心管放回水浴锅中继续孵育;如溶液颜色由黄色变成紫色,向离心管中加入10μl 3M的醋酸*溶液)。短暂离心后,将离心管室温放置5分钟。
    4、向离心管中加入20μl充分混匀的Magbeads,涡旋震荡5秒钟后将其放入25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟或连续颠倒混匀10分钟。
    5、将离心管放于磁力架上静置1分钟,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
    6、将离心管从磁力架上取下,加入750μl Buffer GW1后涡旋点震1分钟或涡旋震荡5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置2分钟,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
    7、将离心管从磁力架上取下,加入750 ul Buffer GW2(使用前请检查是否已加入无水乙醇)后涡旋点震1分钟或涡旋震荡5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置2分钟,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
    8、重复步骤7。
    9、保持离心管固定于磁力架上,用移液器进一步去除离心管管底和管盖上的溶液,之后室温放置5-10分钟,使乙醇挥发干净。
    注意:如果离心管侧壁上有液珠,可向离心管中加入750μl无水乙醇。盖盖后颠倒离心管(保持离心管固定于磁力架上),之后彻底弃去无水乙醇。
    10、将离心管从磁力架上取下,加入30-100μl Buffer EB。涡旋震荡使磁珠完全悬浮于洗脱液中后将其放于50℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡洗脱10分钟,或将离心管放于50℃水浴锅中孵育10分钟,期间每隔3分钟涡旋震荡10秒钟。
    11、将离心管放于磁力架上静置2分钟,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后用移液器将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。

    二、手动96孔板操作:
    1、在长波紫外灯照射下将目的条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量去除多余的琼脂糖凝胶),称重后将胶块放入2ml 96孔深孔板(简称“深孔板”)中并记录每孔中的样品名称。
    2、向深孔板中加入3倍胶块体积的Buffer MG(如果胶块重0.1 g,其体积为100μl),盖盖后将96孔板放入50℃的水浴锅中孵育10分钟,期间将深孔板放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2次,每次10秒钟。
    3、将深孔板从水浴锅中取出放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟,用8通道移液器向深孔板中加入20μl充分混匀的Magbeads。之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟。
    4、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液,期间避免枪头接触磁珠。
    注意:用废液抽吸系统去除溶液时需将真空泵调节至较小的负压力值,使溶液以一个合适的速度被吸走,速度过快会造成磁珠的丢失。
    5.用手动连续分液器或8通道移液器向深孔板中加入500μl Buffer GW1(加入前检查是否已加入无水乙醇),之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀3分钟。
    6、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液,期间避免枪头接触磁珠。
    7、用手动连续分液器或8通道移液器向深孔板中加入500μl Buffer GW2(加入前检查是否已加入无水乙醇),之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀3分钟。
    8、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液,期间避免枪头接触磁珠。
    9、重复步骤7-8。
    10、用手动连续分液器或8通道移液器向96孔深孔板中加入500μl无水乙醇,之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀1分钟。
    11、将板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液,期间避免枪头接触磁珠。
    12、保持深孔板固定于96孔板磁力架上,将深孔板倒置于干净的吸水纸上放置2分钟。之后将深孔板从96孔板磁力架上取下放于100℃、1600 rpm的恒温混匀仪上静置5分钟。
    13、用电动连续分液器或8通道移液器向深孔板加入50-100μl Buffer EB,之后将深孔板放于100℃(因该恒温混匀仪为悬空加热,洗脱液实际温度在50-60℃之间)、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀10分钟。
    14、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟,用8通道移液器溶液转移至96孔PCR板中盖盖后-20℃保存备用。

    储存条件:室温(15~30℃)

    更多有关磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 DNA纯化的价格及使用说明等,请联系我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:

    ·新型植物RNA提取试剂盒(含DNase I)
    编号:WE0202
    英文名称:RNAnt RNA Extraction Kit(DNase I)
    规格:50次
      本试剂盒适用于从多种植物中提取RNA,即便是从多糖多酚含量丰富的植物中也能成功提取高质量的RNA,如水稻叶片、小麦叶片、玉米叶片、烟草叶、松针、银杏叶、杨树叶、石榴叶、冬青叶、苹果、桃、梨、西红柿、樱桃、杏、香蕉、葡萄、枇杷、桂圆果皮、桂圆果肉、荔枝果皮、荔枝果肉、大豆、花生、玉米、马铃薯块茎、月季花瓣、石榴花瓣,香菇、平菇等样本。独特的裂解液配方,可使细胞中的RNA酶迅速灭活,有效去除多糖多酚对RNA提取的影响,无需*酚、*仿等试剂,同时采用硅基质膜吸附RNA进行纯化,提取的总RNA纯度高,无基因组、蛋白质和其它杂质的污染,可用于Real Time RT-PCR、RT-PCR 、Northern Blot、Dot Blot、和体外翻译等多种下游实验。

    试剂盒组成
    组份 50次
    DNase I 1000 U
    10×Reaction Buffer 1000μl
    Buffer RLS 40ml
    Buffer RW1 40ml
    Buffer RW2(浓缩液) 11ml
    RNase-Free Water 10ml
    过滤柱FS及收集管 50套
    吸附柱RM及收集管 50套
    RNase-Free离心管(1.5ml) 50个

    保存条件:DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存,其它组分室温(15~30℃)。

    自备试剂:β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)

    产品特点
    1、适用范围广:可从各种植物中提取总RNA,即便是多糖多酚含量丰富的植物也能成功提取。
    2、纯度高:彻底去除污染物及下游反应YZ物,提取的RNA适合于多种下游应用。
    3、成功提取的样本:水稻叶片、小麦叶片、苹果、桃、梨、西红柿、樱桃、杏、香蕉、葡萄、桂圆果皮、桂圆果肉、荔枝果皮、荔枝果肉、黄豆、花生、马铃薯块茎、松针、银杏叶、杨树叶、冬青叶、月季等样本。

    RNA得率:
    植物样本(100mg) 总RNA量(μg)
    拟南芥荚果 ~50
    大豆 ~55
    玉米叶片 ~55


    实验前准备及重要注意事项/strong>:
    1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
    ① 使用无RNase的塑料制品和枪头。
    ② 操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
    2、提取的样品避免反复冻融,否则影响RNA提取得率和质量。
    3、Buffer RLS如果产生沉淀,请加热使其溶解后室温放置。
    4、Buffer RLS在使用前请加入β-巯基乙醇,1ml Buffer RLS加20μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RLS室温可保存1个月。
    5、DY次使用Buffer RW2前应按照试剂瓶标签的说明加入无水乙醇。

    操作步骤
    1、匀浆处理:取50-100mg植物组织在液氮中迅速研磨成粉末,加入500μl Buffer RLS(使用前请先检查是否加入β-巯基乙醇),立即涡旋剧烈震荡混匀。
    注意:对于含水量极其丰富的材料,如西瓜果肉,西红柿,梨果肉等,可以适当多加入些材料,最多可增加至200mg;对于富含淀粉的样本或成熟叶片,可适当增加Buffer RLS的用量,最多可增加至700μl。
    2、4℃ 12000rpm(~~13400×g)离心2分钟。
    3、将上清液转入已装入收集管的过滤柱中,4℃ 12000rpm离心1分钟,小心吸取收集管中的上清并转移至新的RNase-Free 离心管(自备)中,枪头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
    4、缓慢加入0.5倍上清体积的无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀),将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中,若一次不能将全部溶液加入吸附柱中,请分两次转入。4℃ 12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
    5、向吸附柱RM中加入350μl Buffer RW1,4℃ 12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
    6、配制DNase I 混合液:取52μl RNase-Free Water,向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl),混匀, 配制成终体积为80μl的反应液。
    7、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液,20-30℃孵育15分钟。
    8、向吸附柱RM中加入350μl Buffer RW1,4℃ 12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
    9、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 4℃ 12000rpm离心1 分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
    10、重复步骤9。
    11、4℃ 12000rpm离心2分钟。
    注意:这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
    12、将吸附柱RM装入新的RNase-Free Centrifuge Tubes(1.5ml)中,向吸附膜的中间部位悬空滴加30-50μl RNase-Free Water,室温放置2分钟,4℃ 12000rpm离心1分钟,得到的RNA溶液保存在-70℃,防止降解。
    注意:
    ① RNase-Free Water体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
    ② 如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
    ③ 如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤12。

    储存条件:2~8℃。


    磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 DNA纯化关键词:磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒,WE0206,MagBeads Gel DNA Extraction Kit


    ·超纯RNA提取试剂盒(DNase I)
    编号:WE0193
    英文名称:SuperPure RNA Extraction Kit(DNase I)
    规格:50次
      本试剂盒是基于TRIzon改进后的柱式总RNA提取试剂盒,本制品可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。首先裂解液充分裂解并匀质化样本,在特有的高盐状态下,RNA特异性地与硅基质结合,在极大程度减少了蛋白污染的同时有效去除了有机溶剂的污染,得到的RNA纯度更好,质量更高。本产品可从各细胞或组织中快速提取总RNA,每次可处理 30-50 mg组织或 5×106 细胞,可同时处理多个不同样品。如果是对微量DN非常敏感的RNA实验,残留的DNA可利用无RNase的DNase在柱上进行消化去除,提取后的RNA可直接应用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。

    试剂盒组成

     
    组份 50次
    DNase I 1000 U
    10×Reaction Buffer 1000μl
    TRIzon Reagent 60ml
    Buffer RW1 40ml
    Buffer RW2(浓缩液) 11ml
    RNase-Free Water 10ml
    吸附柱RM及收集管 50套
    RNase-Free离心管(1.5ml) 50个

    保存条件:DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存,TRIzon Reagent 2~8℃避光保存,其它组分室温(15~30℃)。

    自备试剂:*仿(新开封或提取RNA专用)、70%乙醇(无RNase水配制)、无水乙醇。

    实验前准备及重要注意事项/strong>:
    1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
    1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
    2)配制溶液应使用无RNase的水。
    3)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
    2、样品应避免反复冻融,否则影响RNA提取得率和质量。
    3、使用前若发现TRIzon Reagent有沉淀,可置于56℃水浴几分钟,即可溶解。
    4、DY次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RW2中加入无水乙醇。
    5、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。

    操作步骤
    1、样品处理
    ① 组织:30-50 mg组织在液氮中充分研磨后加入1ml TRIzon Reagent,或在组织样品中加入1ml TRIzon Reagent后匀浆处理。
    注意:样品体积不超过TRIzon Reagent体积的10%。
    ② 单层培养细胞:吸去培养液,加入适量 ,每10cm2加入1ml TRIzon Reagent。
    ③ 细胞悬液:离心收集细胞。每5×106细胞加入1ml TRIzon Reagent。
    2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次,使样本充分裂解。室温放置5分钟,使蛋白核酸复合物完全分离。
    3、以每1ml TRIzon Reagent加入200μl*仿的比例加入*仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置2分钟。
    4、4℃ 12000rpm(~~13400×g)离心10分钟,此时样品分为三层:红色有机相,中间层和上层无色水相,RNA主要在上层水相中,将上层水相移到一个新的RNase-Free离心管(自备)中。
    5、在得到的水相溶液中加入等体积的70%乙醇(无RNase水配制),颠倒混匀。
    6、将上步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中。若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心20秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
    7、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm离心20秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
    8、配制DNase I 混合液:取52μl RNase-Free Water,向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl),混匀, 配制成终体积为80μl的反应液。
    9、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液,20-30℃孵育15分钟。
    10、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
    11、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心20秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
    12、重复步骤11。
    13、12000rpm离心2 分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,彻底晾干。
    注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
    14、将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中,向吸附柱的中间部位加入30-50μl RNase-Free Water,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。
    注意:
    1)RNase-Free Wate体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
    2)如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤14。
    3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤14。

    储存条件:室温(15~30℃)。


    磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 DNA纯化关键词:磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒,WE0206,MagBeads Gel DNA Extraction Kit


    ·FITC标记兔抗山羊IgG(H+L)
    编号:WE0385
    英文名称:Rabbit Anti-Goat IgG, FITC Conjugated
    规格:100μl
    本产品为FITC标记的经亲和纯化的兔抗体,特异识别山羊IgG,检测灵敏度高,本底低,常用于免疫荧光和流式细胞等标记检测。

    免疫原:山羊IgG
    缓冲液:0.01M PBS,50%甘油,pH7.6
    稳定剂:15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
    防腐剂:0.05%叠氮*
    荧光团:FITC,Amax=492; Emax=520
    应用范围:Immunofluorescence(1:25-100)

    ·HRP标记抗His标签单克隆抗体
    编号:WE0335
    英文名称:HRP Conjugated Anti His-Tag Mouse Monoclonal Antibody
    规格:100μl
    该抗体可高度特异识别重组蛋白C末端或N末端和内部的六个连续组*酸标签,而不受邻近*基酸组成的影响,可用于检测各种表达载体表达的His-Tag融合蛋白。产品经HRP直接标记,无需使用二抗,可直接用相应酶底物显色或化学发光法检测目的蛋白,减化了实验步骤,避免由二抗交叉反应引起的非特异性条带。

    抗体类型:鼠IgG
    免疫原:人工合成多肽
    标记物:HRP
    应用范围:WB(1:500-3000)、ELISA(1:1000-20000)

    ·唾液基因组DNA提取试剂盒
    编号:WE0184
    英文名称:Saliva DNA Extraction Kit
    规格:50次|200次
      本试剂盒适合于从新鲜唾液或唾液/保存液混合液中提取基因组DNA。本产品纯化过程不需使用*酚或*仿等有毒溶剂,无需乙醇沉淀。优化的缓冲体系使DNAGX特异地结合到硅基质离心吸附柱上,PCR和其他酶促反应的YZ剂可通过两步洗涤步骤被有效去除,ZH使用低盐缓冲液或水洗脱,即可得到高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

    试剂盒组成
    组份 50次 200次
    Buffer GL 25ml 100ml
    Buffer GW1(浓缩液) 13ml 52ml
    Buffer GW2(浓缩液) 15ml 10ml
    Buffer GE 15ml 60ml
    蛋白酶K 2×25mg 180mg
    蛋白酶K 储存液 2×1.25ml 2×5ml
    吸附柱DM及收集管 50套 200套


    自备试剂:无水乙醇

    实验前准备及重要注意事项/strong>:
    1、向蛋白酶K 中加入指定用量(1.25ml/9ml)的蛋白酶K 储存液使其溶解,使其浓度为20mg/ml。配制好的蛋白酶K -20℃保存,勿长时间室温放置,以免影响其活性。其他组分可以在干燥、室温(15-25℃)环境下稳定保存一年。如需保存更长时间,可置于2~8℃。
    2、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
    3、DY次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
    4、使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
    5、如果下游实验对RNA污染比较敏感,可以在第3步中加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml),RNase A本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,货号:WE0225。
    6、若要在室温下长时间保存唾液DNA,推荐使用本公司的唾液DNA保存管(货号:WE0402)。

    操作步骤
    1、加入唾液样本或唾液/保存液混合液400μl 。
    注意:
    1)加入保存液的唾液混合物需在提取前50℃水浴1小时或50℃空气温箱2小时。
    2)如需要增加样本体积,则倍比增加步骤2-4中的蛋白酶K 、Buffer GL和无水乙醇的体积,步骤5中液体可分多次转入。
    2、加入40μl 蛋白酶K 。
    3、加入400μl Buffer GL,涡旋震荡充分混匀,56℃水浴15-30分钟。
    注意:如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl浓度为100 mg/ml的RNase A溶液(货号:WE0225),涡旋15秒,室温放置2分钟。
    4、短暂离心以去除管盖内壁的水珠。加入400μl无水乙醇,涡旋震荡充分混匀。短暂离心。
    注意:
    1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
    2)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。
    3)GL和无水乙醇后可能形成溶胶状产物,此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。
    5、上一个步骤中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Column DM)中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm(~13400 ×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
    6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
    7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
    注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤7。
    8、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
    注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
    9、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
    注意:
    1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
    2)Buffer GE在65-70℃水浴预热,离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
    3)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

    储存条件:室温(15~30℃)。



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