双分子荧光互补（BiFC）

一、 实验原理：
在荧光蛋白（YFP、GFP、Luciferase等）的两个β片层之间的环结构上有许多特异性位点可以插入外源蛋白而不影响荧光蛋白的荧光活性。BiFC技术正是利用荧光蛋白家族的这一特性，将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段，再分别与目标蛋白融合表达。如果两个目标蛋白因物理相互作用而靠近，就使得荧光蛋白的两个分子片段在空间上相互靠近，重新形成有活性的荧光基团而发出荧光。在烟草植株活体细胞（植物基因）或293细胞（动物细胞）中检测蛋白质-蛋白质相互作用。

二、实验步骤：
1. 挑取单克隆于LB液体培养。
2. 将农杆菌转接到LB液体培养基中（加有与1相同的抗生素）。加入乙酰丁香酮和MES，28度摇床培养。
3.离心收集菌体。
4. MgCl2重悬菌体加入AS。
5. 取正处于生长期的烟草叶片，使用针头在叶片反面扎些小孔。
6. 将侵染液装入5 ml 注射器内，用拇指按压注射器反板将液体从叶片下表皮注射到烟草叶片内。注射后，烟草叶片会出现湿润的现象。本实验为BiFC 验证实验，注射前需将组合农杆菌进行混合。
7. 注射后72小时，取样通过激光共聚交荧光显微镜检测荧光信号。

三、实验结果：
激光共聚焦拍照。


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