琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 核酸电泳和回收

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 核酸电泳和回收在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 核酸电泳和回收
编号：WE0168
品Pai：百奥莱博
规格：50次|200次
产地：国产|进口
  本试剂盒采用新型硅基质膜技术和试剂配方，通过独特的离心吸附柱快速的结合DNA-洗涤-洗脱步骤即可从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化100bp-10 kb的DNA片段，溶胶速度快，每个吸附柱ZG可吸附10μg的DNA，同时有效去除引物、核苷酸、酶、矿物油、琼脂糖等杂质。纯化回收的DNA纯度及浓度高，完整性好，回收率高，可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。

试剂盒组成：

 

组份	50次	200次
Buffer PG	25ml	100ml
Buffer PS	15ml	60ml
Buffer PW(浓缩)	10ml	50ml
Buffer EB	10ml	30ml
离心吸附柱DM及收集管	50套	200套

产品特点：
1、快速简单：操作步骤少，简单三步即可获得即用型DNA。
2、回收率高：新型硅基质膜技术和试剂配方保证每次ZD量回收到纯度极高的目的DNA。
3、处理量大：每个离心吸附柱每次最多可吸附的DNA量为10μg。

自备试剂：无水乙醇，异丙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、DY次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
2、使用前请检查Buffer PG，如果出现结晶或者沉淀，可在37℃水浴中放置3-5分钟，即可恢复澄清。
3、电泳时使用新的电泳缓冲液，避免影响电泳和回收效果；如下一步实验要求较高，请尽量使用TAE电泳缓冲液。
4、切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
5、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少，洗脱体积越少，回收率越低。
6、将水浴锅预热至50℃。
7、Buffer PG中含有pH指示剂，当pH≤7.5时溶液的颜色为黄色，此时DNA才能够有效的与膜结合，当pH值偏高时溶液的颜色变为桔红色和紫色，需要进行调整。
8、所有离心步骤均可室温下进行。

操作步骤：
1、将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)，放入干净的离心管(自备)中，称量计算凝胶重量(提前记录离心管重量)。
注意：若胶块的体积过大，可将胶块切成碎块。
2、向胶块中加入1倍体积Buffer PG(如凝胶重为100 mg，其体积可视为100μl，依此类推)。
3、50℃水浴温育，其间每隔2-3分钟温和地上下颠倒离心管，待溶胶液为黄色，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟直至胶块完全溶解。
注意：
1)凝胶完全融解后胶溶液为黄色，可进行后续操作；若胶溶液为桔红色或紫色，可向胶溶液中加10-30μl 的3 M醋酸*(pH 5.0)，将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作。
2)胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱，吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。
4、(可选步骤)当回收片段<300 bp时，应加入1/2胶体积的异丙醇，上下颠倒 混匀(如凝胶重100 mg，则加入50μl的异丙醇)。
5、柱平衡：向已装入收集管中的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS，13000rpm(~～～16200×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、将步骤3或4所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：吸附柱容积为750μl，若样品体积大于750μl 可分批加入。
7、向吸附柱中加入450μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如果纯化的DNA用于盐敏感的实验(例如平末端连接或直接测序)，建议加入Buffer PW静置2-5分钟再离心。
8、重复步骤7。
9、13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱放到一个新的1.5ml离心管(自备)中，向吸附膜中间位置悬空滴加50μl Buffer EB，室温放置2分钟。13000rpm离心1分钟，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意：
1)为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟。
2)洗脱体积不应小于30μl，体积过少会影响回收效率。
3)回收大于10 kb的DNA片段时，Buffer EB应在50℃水浴中预热，可增加回收效率。


备注：本试剂盒也适用于PCR产物的纯化回收。在PCR反应液中加入等体积的BufferPG，充分混匀(对于回收小于150bp的小片段可将溶液的体积增加到3倍以提高回收率)接上述步骤5进行后续操作。

储存条件：室温(15～30℃)。

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琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 核酸电泳和回收关键词：琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒,Gel DNA Extraction Kit,WE0168


·全血Taq DNA聚合酶
编号：WE0127
英文名称：BloodTaq DNA Polymerase
规格：2500U
  本品是通过缺失Taq DNA Polymerase N端一段*基酸和突变改造得到的新型DNA聚合酶。通过改造后使本产品能够全血中存在的YZ剂产生耐受作用，能够直接扩增人和小鼠全血样品中的DNA而无需事先对基因组进行提取和纯化。PCR产物3’端为A，可直接用于T/A克隆。

产品组成：

组份	2500U
BloodTaq DNA Polymerase，5 U/μl	5×100μl
BloodTaq PCR Buffer, 10×	5×1.8ml

注意： BloodTaq PCR Buffer含有30 mM MgCl2

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；
5、室温存放一周，无明显活性改变。

使用方法：
1、使用前请将BloodTaq DNA Polymerase反复颠倒至完全混匀。
2、将PCR薄壁管置于冰上，加入除全血外的以下试剂。
 

试剂	50μl反应体系	终浓度
BloodTaq DNA Polymerase	1μl
BloodTaq PCR Buffer, 10×	5μl	1×
dNTP Mix，2.5 mM each	4μl	200μM each
Forward Primer(10μM)	2μl	0.4μM
Reverse Primer(10μM)	2μl	0.4μM
全血	≤10%
RNase-Free water	xμl
Total	50μl

注意：
a.加入全血前反复上下吸打完全混匀各种试剂、
b.DNA模板：可以使用肝素*、Na-EDTA、K-EDTA或柠檬酸*处理全血。通常建议全血含量为5-10%。不推荐使用高浓度血液。对于高GC含量的模板，加入10%DMSO。
c.引物：寡核苷酸引物长度通常含20-30个核苷酸，并且GC含量在40-60%并均匀分布于引物中。在常规的PCR反应中，引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。

3、ZH将全血加入管底。
4、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min
变性	95℃	30 s	35-40 个循环
退火	50-68℃	30 s
延伸	72℃	250-500 bp/min
终延伸	72℃	10 min

注意：
a.PCR仪于94-95℃预热，将样品放置于PCR仪上开始循环。
b.BloodTaq提高了冷敏感性，具备了一些热启动特性。通常可以通过在冰上配制反应成分、ZH加入聚合酶以及将热循环仪预热至变性温度(95℃)后立即进行反应来避免非特异性产物的产生。
c.变性温度与时间：在PCR循环前为了充分裂解血液细胞和释放/变性DNA，要求初始变性为95℃ 5分钟。
d.退火温度与时间:退火时间通常为30秒-1分钟。退火温度可以低于理论退火温度(Tm)5℃开始，通过梯度PCR进行优化。
e.延伸时间：延伸反应通常在72℃下进行。一般每250-500 bp延伸时间为1分钟。推荐72℃ 10分钟进行ZZ延伸。
f.通常35-40个循环可以达到ZY扩增。

5、结果检测：反应结束后取5μl反应产物并加上电泳缓冲液一起电泳检测结果。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 核酸电泳和回收关键词：琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒,Gel DNA Extraction Kit,WE0168


·血块基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0185
英文名称：BloodClot Blood DNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒供了一种快速、简单、GX的从血片中提取基因组DNA的方法。既适用于未加抗凝剂的血液，也可用于加入EDTA、柠檬酸盐、肝素等抗凝剂的血液样本。样品裂解后，DNA被选择性的吸附到硅基质膜上。两步漂洗后，高质量的DNA被溶解到洗脱液中。纯化得到的DNA无酶YZ剂和其他杂质的残留，A260/A280的比值在1.5-2.3。DNA最长可达50 kb，适用于PCR，Real-time PCR、Southern blotting等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GC	15ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer PW2(浓缩液)	18ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
吸附柱DC及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇

产品特点
1、适用于凝固血液样本的高纯度总DNA分离纯化。
2、无需有机溶剂提取以及乙醇沉淀，彻底去除污染物及下游反应YZ物，快速提取高品质DNA。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、DY次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer PW2中加入无水乙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
3、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GC是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GC和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解
4、将一个水浴锅预热至56℃，另一个水浴锅预热至70℃。
5、可将洗脱缓冲液Buffer GE预热至70℃。

操作步骤：
1、向1.5ml离心管中加入20μl 蛋白酶K 溶液，然后再加入180μl Buffer GTL。
注意：若样品数量较多，蛋白酶K 和Buffer GTL可按比例混合，然后将200μl混合物加入到1.5ml的离心管中。
2、将取下的干血片放入上一步中的离心管中，剧烈涡旋混匀并短暂离心。56℃孵育30-60分钟，期间每隔10分钟将离心管涡旋10秒。
3、加入200μl Buffer GC，彻底涡旋混匀。短暂离心后，70℃孵育10分钟，期间每隔3分钟将离心管涡旋10秒。
注意：加入Buffer GC后可能会产生白色沉淀，大部分情况下，在孵育过程中，沉淀会消失，沉淀不会影响后续的实验。
4、待步骤3离心管中样品降为室温后加入100μl无水乙醇，轻轻颠倒混匀样品，室温放置5分钟。短暂离心，将管壁内壁的液体富集于离心管底。
注意：
1)需要将样品和乙醇混合均匀。
2)当室温高于25℃时，需要先将乙醇预冷。
5、将上一步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中，12000rpm(～13400×g)离心1分钟。倒掉收集管中的废液，将Spin Column DC放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟。倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer PW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、重复步骤7。
9、12000rpm离心2分钟，倒掉废液，将吸附柱置于室温放置2-5分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱置于一个无菌的1.5ml离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-100μl BufferGE，室温放置2-5分钟。12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用去离子水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用去离子水做洗脱液应该保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时会降低洗脱效率。
2)离心前室温孵育5分钟可以增加产量；用另外的20-200μl Buffer GE再次洗脱可以增加产量。
3)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置5 min后再次离心；若洗脱体积小于20μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或去离子水洗脱。
4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。

北京百莱博科技有限公司是核酸电泳和回收产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 核酸电泳和回收。