phospho-IGF1R (Tyr980)抗体

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从抗体溶液中除去甘油的详细程序。
甘油是一种防腐剂，用于YZ细菌、真菌等污染物的生长。然而，它在抗体溶液中的存在会影响抗体在细胞培养实验中的使用，因为它对细胞有毒性。它也能干扰抗体结合，YZ辣根过氧化物酶的活性。
许多抗体产品含有叠氮钠，这是对个人数据表提供的信息。如果该抗体用于细胞培养试验或结合，建议从抗体溶液中除去甘油。



以下三个步骤可以用来除去甘油。
透析
透析装置可用于从0.1毫升到70毫升的样品中除去甘油。这是一种半透膜，可在不同的尺寸尺寸和孔径范围内使用。使用一个孔径大小在10-30 kDa的膜将允许叠氮化物通过膜，但会保留在溶液中的抗体和其他蛋白质。
IgG的分子量为150 kDa（IgM为600 kDa）。甘油的分子量为65。
所需材料
透析膜/管适合的直径和长度，以适应样品体积（10 - 30 kDa的分子量切断）
Dialysis buffer, e.g. PBS, TBS or HEPES (pH range 6–8)
大烧杯
4°磁力搅拌器搅拌棒
程序
1.按照制造商的建议组装透析装置。在透析缓冲液中至少允许1 - 2分钟，使膜能水合。
2.将抗体溶液转移到透析装置中。
3.将透析单元为适当大小的烧杯中含有至少1的缓冲对抗体进行透析。将烧杯放在磁力搅拌器和透析至少1小时4°C.
4.改变缓冲液和透析一次至少1小时。重复直到缓冲变化所需的人数已经达到。确保缓冲区被更改至少3次。
程序
1.如果正在使用商用净化塔，请参阅制造商的使用说明。
2.从旋转柱上取下盖子，离心1000克，取出2分钟，取出储存液。
3.把柱子放进收集管里。
4.在制造商建议下用平衡缓冲液填充柱，在1000克离心2分钟。
5.重复3次，丢弃收集的流量。
6.将1～3毫升抗体样本缓慢地放在填充床中间，离心1000克，离心2分钟。
7.收集回收洗脱液（抗体）位于集合管。
抗体纯化试剂盒
试剂盒可用于纯化抗体，也可用于除去叠氮化物。
以下图工具可用于从含BSA，甘氨酸溶液纯化抗体，三或甘油。它也可用于从腹水或免疫血清等粗样品中纯化抗体。
该方法包括抗体蛋白树脂和由一个简单的清洗过程中去除有害物质的捕捉，可以使用一个标准的microfuge进行。纯化产物然后洗脱中和。
1、pH的应用范围及选择
抗原修复液的pH非常重要，有效的抗原修复pH要比修复液的化学成分更重要，同样的修复液随着pH的升高染色的强度逐渐增强，但ZJpH范围为6.0-10.0。目前大家公认的的抗原修复液是pH6.0的柠檬酸盐缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液。作为通用修复液碱性pH的修复液要比酸性的有效，而对固定很长时间旧的存档组织，酸性pH的修复液则优于碱性的修复液。
2、抗原修复时应选择ZJ温度
70-90℃的温度对未经固定的蛋白质可发生变性，但经固定的蛋白质，温度必须达到92℃以上方能使其变性。研究结果显示，温度为92-98℃是合适的，95℃效果。
3、抗原修复液必须遵循自然降温规律，否则效果不好或达不到抗原修复的目的
抗原修复持续时间过后，取出放于室温中让其慢慢地降温，JD不能为了争取时间，强行用冰块或冷水使其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其他的束缚或联结，要有一个自然环境让其自然放松下来，随着温度的降低，它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。
4、尽量使用足量的抗原修复液
应用于抗原修复的液体，一定要充足，防止切片干涸。应用大量的抗原修复液时，由于它的量较大，可延缓液体的沸腾时间，增加切片受微波辐射的量，对抗原修复将达到彻底。
抗体保存指南
不同类型抗体的保存指南，避免抗体污染或损坏。
请务必查看数据表，获取具体的保存建议。我们不对保存不当的抗体负任何责任。如果保存和处理得当，大部分抗体的活性都可保留数月，甚至若干年。
保存温度
对于我们的许多抗体而言，分装为小等份在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下冻存是ZJ的保存条件。分装抗体可以ZD限度减少冻融对抗体造成的损坏，还可避免多次从同一管中移取抗体而引入污染。分装后抗体只可冻融一次，如有剩余，应保存在 4 ℃ 下。
收到抗体后，请以 10,000 × g 离心 20 秒，沉降滞留在管盖螺纹中的溶液，然后分装抗体并将其转移至低蛋白质结合的微量离心管中。分装抗体的量取决于您在实验中常用的量。分装抗体应不少于 10 μL；分装抗体量越少，浓度就越容易受到蒸发以及储存样品管表面吸附的影响。
在大部分情况下，可在收到抗体之后立即将其保存于 4 ℃ 下，可保存 1 至 2 周。遵循数据表上的保存建议非常重要。
特例
切勿冻存酶偶联抗体，而应将其保存在 4 ℃ 下。冻融不仅会影响抗体的结合能力，还会降低酶活性。
偶联抗体（无论是偶联有荧光染料、酶还是生物素）应保存在深色样品瓶中或用锡箔纸包裹样品瓶。暴露于光下会影响偶联物的活性。荧光偶联物尤其容易发生光致漂白，因此在实验各阶段都应避光保存。
IgG3 同型抗体的独特之处在于其解冻后容易形成聚集体，因此应始终保存在 4 ℃ 下。
腹水液中可能含有蛋白酶，因此收到后应尽快冻存。
污染
为了防止微生物污染，可将甘油加入抗体制备物中，甘油的ZZ浓度为 0.02% (w)。我们的多款抗体中都含有这种保护剂，其浓度范围为 0.02%-0.05%。数据表的保存缓冲液部分将对此进行说明。
不使用甘油的情况
如果要用抗体对活细胞进行染色或处理，或者要用抗体进行体内研究，请务必使用不含甘油的制备物。这种KJ剂对大部分生物体都有毒害作用：它会阻断细胞色素电子传递系统。
甘油会干扰涉及胺基的所有偶联反应，因此必须在进行偶联反应之前将其去除。完成偶联反应之后，可使用甘油保存抗体。另一种可用的KJ剂是 0.01% 硫柳汞钠（硫柳汞），这种物质不含伯胺。
抗体溶液中的甘油可通过渗析或凝胶过滤去除。IgG 的分子量为 150,000 Da（IgM 约为 600,000 Da），甘油的分子量为 65 Da。截留分子量为 14,000 Da 的微渗析装置可使叠氮化物顺利扩散出去，而抗体得以保留。
渗析过程在烧杯中（置于磁力搅拌器上，温度保持 4 ℃）进行，每毫升抗体使用至少 1 升预冷的 PBS，搅拌渗析装置 6 小时。更换 PBS 两次，每次更换后均搅拌至少 6 小时。如有可能，所有材料都应灭菌，并且应在无菌条件下处理所得制备物。
冻融损坏
反复冻融可能使抗体变性，导致抗体形成聚集体，从而降低其结合能力。
对大部分抗体而言，在 -20 ℃ 下保存就已足够；在 -80 ℃ 下保存并无明显优势。应避免使用无霜冰箱，因为此类冰箱的冻融循环（用于减少霜的形成）正是保存此类抗体需要避免的。出于相同的原因，应将抗体样品瓶放在冰箱中温度波动最小的区域，例如抵靠冰箱背板放置而不是置于冰箱门架上。
有些研究人员向抗体中加入冷冻保护剂甘油（ZZ浓度为 50%）以防止冻融损坏；甘油可将冷凝点降至 -20 ℃ 以下。虽然这种方法可用于多种抗体，但我们仅对少数几种 Abcam 抗体在这种保存条件下的稳定性进行了测试，我们仅担保遵循数据表建议进行保存的抗体的性能。我们不建议在 -80 ℃ 下保存含甘油的溶液，因为该温度低于甘油的冷凝点。请注意，甘油可能会被细菌污染。如果加入了甘油或任何冷冻保护剂，应当小心操作，确保获得无菌制备物。
蛋白质浓度和稳定性
将抗体稀释至工作浓度后，在 4 ℃ 下保存不得超过一天。一般而言，以高浓度保存的蛋白质更不易降解，理想浓度是 1 mg/mL 或更高。这就是将蛋白质（如 BSA）作为稳定剂加入抗体溶液的基本原理。加入的蛋白质还能尽可能减少抗体结合到容器壁上造成的损失。请勿向将要进行偶联的抗体中加入蛋白质稳定剂，因为蛋白质稳定剂会与抗体竞争，降低偶联效率。