北京现货动物RNA提取试剂盒(柱式提取)(无需氯仿)库存

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名称：动物RNA提取试剂盒(柱式提取)(无需*仿)
品Pai：百奥莱博
规格：50次
编号：BTN160905
产地：国产|进口
英文名：Animal RNA column extraction kit(chloroform-free)
本试剂盒是在本公司柱式动物总RNA快速提取试剂盒基础上升级的免*仿产品，可用于从各种动物组织(包括白细胞)快速提取总RNA。

试剂盒特点：
1. 免去*仿抽提步骤，操作更加简单快速，整个过程只需要不到十分钟(对一个样品而言)。
2. 不使用有毒的*仿，健康环保。
3. RNA纯度很高，OD260/OD280一般在2.0左右。
4.一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
5.适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。
6. 所得RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
7. 性价比高于进口的柱式RNA

试剂盒组成：

 

组分	编号	规格
溶液A	BTN71201A	50mL
溶液B	BTN71201B	25mL
离心吸附柱	BTN90303	50套
通用洗柱液	BTN60408	50mL
RNA洗脱液	BTN71207	10mL
使用手册		1份

储存条件：常温运输和保存，但溶液A需要4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步骤是针对在1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的，如果处理样品量大，请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。

1. 根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用：
a)对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10平方厘米细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
b)对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1-5×106悬浮细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg组织加1mL溶液A，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg/ mL溶液A，否则十分容易产生DNA污染。
d)对RNAhold保存组织：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，其余操作同新鲜组织的处理。
2. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，12000rpm室温离心3～5分钟。
3. 将上清液(残留沉淀为每裂解的细胞和组织)转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。
4. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。
5. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
6. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
7. 加0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
8. 加0.3mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
9.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
10. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free收集管中，加入50-100μL RNA洗脱液。
11.室温12000 rmp离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
12. RNA的电泳检测：本试剂盒提取的RNA用甲醛变性胶电泳，如果在非变性的普通琼脂糖胶(in TAE或TBE buffer)上电泳，一定要使用RNA专用上样液RNAload(操作详见RNAload使用手册)，千万不要使用常用的DNA上样液，因为DNA上样液没有经过去RNase处理，也不能将RNA变性，得到的带型将十分杂乱。
13. RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
14. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
15. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议使用甲醛变性胶电泳和RNA专用上样液(如百奥莱博的RNAload)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。

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编号	名称
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BTN131292	PFG固定液
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BTN120505	Dam甲基转移酶
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