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百奥莱博专业生产销*(代"售")红霉素溶液北京现货促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:红霉素溶液北京现货促销
规格:10mL
英文名:Erythromycin Solution
编号:BTN120690
产地:国产|进口
品Pai:百奥莱博
本产品为溶于2N HCl浓度为100mg/mL的红霉素溶液。红霉素(Erythromycin A;Abomacetin;EMcin;Eritrocina;Erycen;Staticin;Retcin;Stiemycin),分子式:C37H67NO13,分子量:733.93,CAS号:114-07-8 。溶于乙醇。红霉素是由红霉素链霉菌(Streptomyces erythreus)所产生的大环内酯(macrolide)系的代表性的KJ素。主要对革兰氏阳性菌具有KJ性。
抗性机制:在转肽步骤YZ肽链延长,与核糖体结合YZ细菌蛋白合成,对细菌诱发红霉素抗性。
储存条件:低温运输,-20℃避光保存,有效期6个月。
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红霉素溶液北京现货促销关键词:Erythromycin Solution,114-07-8,红霉素溶液
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·LB培养基
编号:BTN100602
英文名称:Lysogeny Broth Medium,Powder
规格:250g
LB培养基是由美国科学家Giuseppe Bertani在1951年独立开发。但现在常用的LB配方是由Miller修改而成,主要是去掉Glucose并把NaCl浓度从0.5 g/L增加到10 g/L。本产品就是根据Miller配方制备的干粉型培养基。
储存条件:常温运输及保存,有效期两年。
使用方法:称取本产品25.0 g于1 L蒸馏水或去离子水中,加热溶解,分装,121℃高压灭菌15分钟,备用。
·5×SDS-PAGE上样液
编号:BTN81204
英文名称:SDS-PAGE Loading Buffer,5×
规格:1mL
本产品是专门用于SDS-PAGE电泳样品上样用的缓冲液,其浓度为5×,配胶时即开即用,非常方便。
储存条件:低温运输、-20℃保存,有效期一年。
·His标记蛋白质微量纯化套装
编号:BTN100102A
英文名称:One-Stop His-Tagged Protein Miniprep Pack(A)
规格:2mL
本产品基于His-Ni亲和层析的蛋白质纯化方法是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法,本产品就是专门用于上述实验的一站式产品。
产品特点:
1.一站式套装,含所需的介质、溶液和层析柱,用户只需要提供表达His蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可,非常方便。
2. 专一性强,一次过柱即可获得纯度高达95%的His-标记蛋白。
3.变性和非变性条件均可使用,也适用于纯化包涵体中的His标记蛋白。
4. 每次可以处理20mL的表达菌液,适合初步筛选和鉴定。
5. 提供4mL浓度为50%的Ni-Agarose介质,其ZD载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质。
6. 介质为CL-6B琼脂糖,含四个Ni离子螯合基团,比只有四个Ni离子螯合基团的Ni-IDA更有效。
7. 本介质可以反复使用多次。
试剂盒组成:
成份 | 规格 |
Ni-Agarose介质,50% | 4mL |
1M咪唑溶液 | 25mL |
1M Tris-HCl pH7.9 | 25mL |
5M NaCl溶液 | 25mL |
溶菌酶(20 KU/mg) | 30mg(A型无) |
Benzonase(2U/μL) | 20μL(A型无) |
盐*(代"酸")胍 | 6g |
尿素 | 20g |
PMSF(10mg/mL) | 0.5mL |
亲和层析柱,6mL | 1套 |
使用手册 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,但介质需4℃保存,溶菌酶、Benzonase和PMSF需-20℃保存,有效期一年。
自备试剂:去离子水、20%乙醇、0.45μm滤膜
使用方法:1.将Ni-Agarose介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据His蛋白产量决定,其ZD载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质,请根据实验需要取适量的Ni-Agarose介质加入层析柱)。
2.用5倍柱体积(指填料的体积,下同)自备去离子水洗柱,共三次。
3.用5倍柱体积的新配结合液洗柱(配方如下,以10mL为例),共三次:
成分 | 用量 | 在结合缓冲液中浓度 |
1M Tri-HCl(pH7.9) | 0.2mL | 20mM |
1M咪唑溶液 | 0.1mL | 10mM |
5M NaCl溶液 | 1mL | 500mM |
自备去离子水 | 8.7mL | - |
4.室温5000g离心10分钟收集20mL表达菌液,弃上清,沉淀(约100mg)放冰上待用或放-80℃保存。用不加诱导物的菌液做对照样。
5.如果用本产品A型:加入1mL冰浴的结合液(1mL菌液需要用50μL结合液),再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液,冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索,但裂解物必须不粘稠,否则会堵塞层析柱。如果用本产品B型:加入1mL冰浴的含溶菌酶的结合液(先取20mL结合液,加入所有30mg溶菌酶干粉,溶解后分装成1mL/管,剩余的-20℃放置),再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液和1μL Benzonase,冰上放置30分钟。
6.4℃下13000-15000g离心10分钟,去除残留细胞和细胞碎片以防堵柱,收集上清,留样做SDS-PAGE电泳对照。如果要纯化裂解液中可溶部分的His标记蛋白,则直接进入第7步;如果要纯化裂解液中包涵体(沉淀部分)中的His标记蛋白,则直接进入第12步。
A、纯化细胞裂解液中可溶部分的His标记蛋白7.将上步得到的上清液上柱,让重力使裂解液自然流出。如要提高His标记蛋白与介质的结合效率,可用试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上,让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。
8.用10倍柱体积结合液洗柱(配方见上表),收集并保存穿透液(含杂质或没被吸附的His标记蛋白,可做SDS-PAGE电泳的对照)。
9.如果用一步式洗脱法(适合已经找到ZJ咪唑浓度的情况),则直接用适量的新鲜配制的洗脱液洗柱,收集并保存穿透液(含His标记蛋白)。洗脱液的配方如下(以1mL体积和ZJ咪唑浓度是500mM为例):
成分 | 用量 | 在洗脱液中的浓度 |
1M Tri-HCl(pH7.9) | 20μL | 20mM |
1M咪唑溶液 | 500μL | 500mM |
5M NaCl溶液 | 100μL | 500mM |
自备去离子水 | 380μL | - |
10.如果用多步式洗脱(适合不知道ZJ咪唑浓度或一步式洗脱杂质多的情况),则按上表配制一系列咪唑浓度不同(如40、60、100、200、300和500mM),其他成分浓度不变的洗液,按从低到高的顺序洗涤并收集样品,SDS-PAGE电泳检测His标记蛋白所在的区域。
11.洗脱后,依次使用10倍柱体积的去离子水洗涤柱子,再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没),ZH堵住层析柱下端的漏口,4℃保存待下次使用。
B、纯化包涵体中His标记蛋白12.将第6步离心得到的包涵体沉淀重悬于1-3mL含盐*(代"酸")胍结合液中或1-3mL含尿素结合液中(建议优先使用尿素做变性剂,因为得到的洗脱液可以直接跑SDS-PAGE,而用盐*(代"酸")胍的洗脱液需先除盐后才能电泳)。冰浴1小时以使包涵体溶解,期间可轻柔摇晃几次。含变性剂的结合液配方如下(以10mL为例):
成分 | 含盐*(代"酸")胍结合液 | 含尿素结合液 |
1M Tri-HCl(pH7.9) | 200μL | 200μL |
5M NaCl溶液 | 1mL | 1mL |
盐*(代"酸")胍(MW=95.6) | 5.7g | 无 |
尿素(MW=60.1) | 无 | 4.8g |
自备去离子水 | 加水到10mL | 加水到10mL |
13.室温10000×g离心20分钟,沉淀为未溶解的包涵体。将上清(含溶解后的His标记蛋白)以自备的0.45μm滤膜过滤。
14.将滤过液上柱,后续纯化步骤同第7-第11步。只是所用结合液和洗脱液均含变性剂,含变性剂的洗脱液配方见下表(以1mL为例):
成分 | 含盐*(代"酸")胍洗脱液 | 含尿素洗脱液 |
1M Tri-HCl(pH7.9) | 20μL | 20μL |
1M咪唑溶液 | 500μL | 500μL |
5M NaCl溶液 | 100μL | 100μL |
盐*(代"酸")胍(MW=95.6) | 0.57g | 无 |
尿素(MW=60.1) | 无 | 0.48g |
自备去离子水 | 补水到1mL | 补水到1mL |
注意事项:整个实验需避免含巯基乙醇、DTT和EDTA等成分。若洗脱液不能将His标记蛋白洗脱下来,可改用pH6.5- 4.5的pH递减的Tris-HCl洗脱。
红霉素溶液北京现货促销关键词:Erythromycin Solution,114-07-8,红霉素溶液
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·ECD-G固定液
编号:BTN131294
英文名称:ECD-G Fixative Solution
规格:250mL
本产品为碳二亚酰胺、戊二醛等组成的混合固定液。常用于多肽类激素的固定,对酶等蛋白质的固定也有良好效果。ECD(1-(3-二甲*基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐*(代"酸")盐)单独应用时,边缘固定效应重,但与戊二醛、Tris及PB联合应用,效果明显改善,细胞质仍可渗透,利用细胞中抗原的定位,超微结构保存较好。ECD-G固定液是一种用于培养细胞电镜水平免疫细胞化学研究的很好的固定剂。
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
·BAL 31核酸酶
编号:BTN120409
英文名称:BAL 31 Nuclease
规格:50U
BAL 31核酸酶纯化自埃氏交替单胞菌BAL-31培养物。BAL-31核酸外切酶降解双链DNA的3´和5´末端,不切割分子内部。该酶同时还是高度特异性的单链核酸内切酶,在切刻、缺口、双链DNA单链区和双链RNA的单链区进行切割。其工作原理图如下:
产品特点:1.从两端逐步对双链DNA进行切割,缺失的长度适合于100~1000个碱基左右。
2.加入EGTA可失活。
3.限制性酶切图谱的构建。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
活性定义:1单位指在50μl反应体系,1X核酸酶BAL-31反应缓冲液,30℃条件下,10分钟从线性双链φX174 DNA(40μg/ml)的两端各切下200个碱基对所需要的酶量。
使用方法:1.在离心管中加入下列溶液:
成分 | 用量 |
pBR322 -Ava I fragment | 3μg(2.0pmol) |
2×反应 Buffer | 37.5μl |
BAL 31 Nuclease | 3~6U |
H2O | up to 75μl |
2.30℃保温。分别于1、2、3 min时各取样25μl。
3.加入20mM EGTA,65℃加热10分钟灭活酶。
4.用1% Agarose电泳确认DNA片段。
注意事项:1.该核酸外切酶的双链产物是平齐末端和粘性末端的混合物。尽管要达到ZJ连接效率需要用合适的聚合酶修复粘性末端,但该混合物仍可以直接进行克隆。
2.如果需要,可以在使用前用反应缓冲液稀释该酶。
3.只有在20mM EGTA存在条件下,酶的热失活才有效。
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温馨提示:不可用于临床ZL。