高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法) DNA纯化

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法) DNA纯化在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法)
规格：10次|50次
编号：WE0189
品Pai：百奥莱博
英文名：CWhipro Circulating Nucleic Acid Midi Extraction Kit
产地：国产|进口
  本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血清、血浆、羊水、尿液等无细胞体液中提取游离DNA。本试剂盒采用可以特异性结合核酸的吸附柱和独特的缓冲液系统，样品裂解后，游离DNA在高盐条件下与硅胶膜结合，在低盐、高pH值时游离DNA从硅胶膜上洗脱下来。本试剂盒使用负压法，同时配备延伸管，可处理多达5ml样本，纯化的DNA产量高、质量好，ZD限度去除蛋白、色素、脂类及其他YZ性杂质污染。纯化得到的游离DNA质量稳定、可靠，可直接用于PCR、荧光定量PCR和二代测序等分子生物学实验。

试剂盒组成：

 

组份	10次	50次
Buffer CL	45ml	220ml
Buffer CB(浓缩液)	60ml	300ml
Buffer GTL	15ml	60ml
Buffer GW1(浓缩液)	3ml	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	3ml	15ml
Buffer EBL	2ml	10ml
蛋白酶K	100 mg	3×180 mg
蛋白酶K 储存液	5ml	30ml
吸附柱DG及收集管	10套	50套
延伸管(20ml)	10个	50个
连接管	10个	50个
离心管(L-1.5 m l)	10个	50个

保存条件：吸附柱DG置于2～8℃，其他组分室温(15～30℃)

产品特点：
1、适合大体积样本：试剂盒使用负压法，配备延伸管，配套使用负压装置可将样品处理量提高至5ml。
2、提取得率高：使用GX微量吸附柱结合目的片段，有效提升核酸的回收率，洗脱体积可在10-150μl之间灵活变化，可浓缩低浓度核酸。
3、纯度高：经纯化和浓缩的游离DNA不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可即用于下游各种应用，包括PCR、荧光定量PCR、二代测序等。

自备试剂：无水乙醇、异丙醇

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向每管蛋白酶K *(代"粉")末中加入指定用量(10次加5ml/50次每瓶加9ml)的蛋白酶K 储存液，使其完全溶解后-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。其它组分可以在干燥、室温(15～30℃)环境下稳定保存一年。如需保存更长时间，可置于2～8℃。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致DNA提取量下降。
3、本试剂盒最多可以从5ml血清血浆、4ml尿液中提取cfDNA。
4、DY次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer CB中加入异丙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
5、DY次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
6、使用前请检查Buffer CL、Buffer CB是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer CL、Buffer CB于56℃水浴孵育重新溶解，混匀后使用。
7、实验开始前将水浴锅预热至60℃。
8、可将洗脱缓冲液Buffer EBL预热至60℃。
9、负压装置。

操作步骤(血清、血浆样本1-5ml)：

1、样品处理：向离心管(自备)中加入1ml血清/血浆样本，若样本不足1ml，加入PBS溶液补至1ml体积。
注意：当样品量超过1ml时，请等比例增加蛋白酶K 、Buffer CL和Buffer CB试剂用量，具体
2、向以上溶液中加入100μl 蛋白酶K ，混匀。
3、加入800μl Buffer CL，剧烈震荡至少30秒。
4、60℃孵育30分钟，其间颠倒混匀数次。
5、加入1800μl Buffer CB(使用前检查是否加入异丙醇)，颠倒混匀10次或剧烈震荡15-30秒。
6、冰浴5分钟。
7、正确连接负压装置，将连接管插到负压装置的插口上。
8、将吸附柱插入到连接管上。
9、将延伸管插入开盖的吸附柱中。
注意： 确保连接管、吸附柱和延伸管连接稳固，防止发生漏液。
10、将冰浴后的混合溶液全部加入延伸管中，开启并调节负压至-900～-800 mbar，缓慢吸走管中溶液。待溶液完全吸走，关闭负压开关，当压力恢复至0 mbar时，小心移去延伸管。
11、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇), 开启并调节负压至-900～-800 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
12、向吸附柱中加入750μl Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇)，开启并调节负压至-900～-800 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
13、向吸附柱中加入750μl无水乙醇，开启并调节负压至-800～-900 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
14、当压力恢复至0 mbar时，将吸附柱取下，置于新的收集管中，12000rpm离心3分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应。
15、将吸附柱置于新的1.5ml离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-150μl Buffer EBL，室温放置3分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。

附表1：不同血清/血浆样本量推荐加入试剂量
 

加入物	加入量(ml)
样本	1	2	3	4	5
蛋白酶K	0.1	0.2	0.3	0.4	0.5
Buffer CL	0.8	1.6	2.4	3.2	4
Buffer CB	1.8	3.6	5.4	7.2	9

储存条件：室温(15～30℃)。
关键词：CWhipro Circulating Nucleic Acid Midi Extraction K,高纯游离DNA中量提取试剂盒,高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法),WE0189


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编号	名称
WE0149	一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(低含量ROX校正染料)
WE0129	一步法RT-PCR试剂盒
WE0323	DAB显色试剂盒(WB IHC)
WE0263	酵母蛋白抽提试剂盒
WE0357	抗GAPDH多克隆抗体
WE0242	UltraStain DNA Marker
WE0130	Real-time RT-PCR MasterMix
WE0159	dNTP混合溶液(10 mM)
WE0341	HRP标记抗His标签多克隆抗体
WE0305	丽春红染色试剂
WE0368	FITC标记驴抗大鼠IgG(H+L)
WE0138	一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(低含量ROX校正染料)
WE0301	X光暗盒(12.7cm×17.8cm)
WE0114	2×BaHF MasterMix(含染料)
WE0374	罗丹明山羊抗大鼠IgG(H+L)
WE0403	尿液DNA样本保存管
WE0254	BL21(DE3)pLysS感受态细胞
WE0165	酵母质粒提取试剂盒
WE0208	磁珠法血液DNA提取试剂盒
WE0395	口腔拭子DNA样本保存管
WE0212	蛋白酶K
WE0116	2×富含GC PCR MasterMix
WE0239	T4 DNA连接酶
WE0261	细菌蛋白抽提试剂盒
WE0106	2×BAmp MasterMix(含染料)
WE0105	BAmp DNA Polymerase
WE0311	Tris-甘*酸转膜缓冲液(pH8.3,10×)
WE0112	2×BaldStar Taq MasterMix(含染料)
WE0150	一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(高含量ROX校正染料)
WE0256	蛋白*(代"磷")酸酶YZ剂混合物
WE0134	SuperSYBR Mixture(低含量ROX校正染料)
WE0304	蛋白印迹膜再生液
WE0227	人类cDNA
WE0160	超纯dNTP混合液(10 mM)
WE0258	RIPA裂解液(强)
WE0378	罗丹明标记山羊抗小鼠IgG(H+L)
WE0396	游离DNA样本保存管(5ml)
WE0253	BL21(DE3)感受态细胞