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SNU-1105细胞

 常见组织细胞的培养方法


体内组织细胞在体外培养时,所需培养环境基本相似,但由于物种、个体遗传背景及所处发育阶段等的不同,各自要求条件有一定差别,所采取的培养技术措施亦不尽相同,现介绍个别组织细胞培养的要点如下:


一节 上皮细胞培养


上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮组织,故上皮细胞培养特别受到重视。但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞,培养时生长速度往往超过上皮细胞,并难以纯化,同时上皮细胞难以在体外长期生存,因此纯化和延长生存时间是培养关键。


体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜,因此培养在有胶原的底物上可能利于生长,另外人或小鼠表皮细胞培养在以3T3细胞为饲养层(用射线照射后)时,细胞易生长并可发生一定程度的分化现象。降低PH、Ca2+含量和温度,向培养基中加入表皮生长因子,均有利于表皮细胞生长。


以表皮细胞为例,用皮肤表皮和分离培养法可获得纯上皮细胞,其法如下(黑木凳志夫 1981)


1、取材:外科植皮或手术残余皮肤小块,早产流产儿皮肤更好,取角化层薄者,切成0.5-1平方厘米小块。


2、置0.02%EDTA中,室温,5分钟。


3、换入0.25%胰蛋白酶中,4℃过夜。


4、分离:取出皮块,用血管钳或镊子将表皮与层分开。


5、取出表皮,剪成更小的块后,置0.25%胰酶中,37℃,30—60分钟。


6、反复吹打,制成悬液。


7、培养:用80目不锈钢纱网滤过后,低速离心,吸去上清。


8、直接加入培养基(Eagle加20%小牛血清)制成细胞悬液,接种入培养瓶,CO2温箱培养。SNU-1105细胞


素尔细胞库提供遗传变异细胞系、正常组织来源细胞系、肿瘤细胞系、工程细胞系、干细胞系,涉及人类,大鼠、小鼠、鸟类、仓鼠、鱼类、猫类、狗、牛、貂、猪、恒河猴、长鼻袋鼠等。


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第二节 内皮细胞培养


内皮细胞易于从大血管分离培养成单层细胞,对于研究内皮细胞再生、肿瘤促血管生长因子(TAF)等有很大价值。


研究人内皮细胞培养以人脐带静脉灌流消化法为简便,其法如下:


1、产后新鲜脐带,无菌剪取10—15厘米长一段,如不能立即培养,可于12小时内保存于4℃。


2、用三通注射器吸取温PBS液注入脐静脉中洗去残血,在入口处用线绳扎紧,以防液体返流。


3、用血管钳夹紧脐带一端,从另一端向脐静脉中徐徐注入终浓度为0.1%的粗制胶原酶,充满血管,消化3—10分钟;注入口用线绳扎,以防液体返流。


4、吸出含有内皮细胞的消化液,于离心管中,注入温PBS轻轻反复冲洗后,一并注入离心管中(此步骤可重复)。


5、离心去上清,加入RPMI1640培养液制成细胞悬液,接种入培养器皿中,置温箱培养。两至三天可见细胞长成单层。


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