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ALH090型无内毒素质粒大量提取试剂盒(高纯质粒)(柱式提取)厂家由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多无内毒素质粒大量提取试剂盒(高纯质粒)(柱式提取)等DNA纯化产品请联系我司咨询订购。
名称：ALH090型无内毒素质粒大量提取试剂盒(高纯质粒)(柱式提取)厂家
规格：10次
编号：ALH090
品Pai：百奥莱博
产地：国产|进口
本试剂盒适用于不含内毒素质粒的高纯度制备。采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，粗提物通过独特的内毒素清除剂选择性结合离心除去内毒素，然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，ZH低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒组份(10次)：
RNaseA(10mg/ml)-————————0.75ml
溶液P1—————————————77ml
溶液P2—————————————77ml
溶液N3—————————————77ml
内毒素清除剂——————————25ml
漂洗液WB————————————2×25ml
洗脱缓冲液EB——————————20ml
吸附柱和收集管(50ml)——————10套
试剂盒特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚，氯*(代"仿")等试剂，也不需要乙醇沉淀。快速， 方便，从100-200 ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.2-0.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80-90 %。
3.独特工艺配方清除内毒素，内毒素含量极低（<0.1 EU/μg DNA），细胞转染效果JJ。也可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序、等各种分子生物学实验。
注意事项
1. 所有的离心步骤如未加另外说明均在室温完成，使用转速可以达到12000g，带50ml转头的台式离心机。
2. 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb 的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、N3 的用量，洗脱缓冲液应在70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间，以增加提取效率。
3. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。
4. 质粒DNA确切分子大小， 必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。
5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱，质粒应该保存在－20℃。质粒DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
储存条件：室温，有效期12个月。
本品别名：无内毒素质粒大量提取试剂盒(高纯质粒)(柱式提取)|不含内毒素质粒大量提取试剂盒|无内毒素质粒大量制备试剂盒.jpg)
关于ALH090型无内毒素质粒大量提取试剂盒(高纯质粒)(柱式提取)厂家的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
·反转录试剂盒
编号：ALH266
英文名称：Reverse transcriptase Kit
规格：50次|100次
本试剂盒是可以除去基因组DNA进行 Real Time RT-PCR 反应的专用反转录试剂。本试剂盒为一管式反转录预混Mix，5 × TRUE RT MasterMix中含有反转录DY链合所需的所有试剂（RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、Buffer）。 通常Real Time RT-PCR等实验需要先用DNase I消化去除RNA中残留的基因组DNA(gDNA) ，但是传统DNase I 处理复杂并容易造成 RNA 的降解和损失。本试剂盒中使用了具有DNA分解活性的特殊 gDNA Eraser 2-5分钟消除gDNA残留，不需要DNase 消化和后续繁琐步骤。反转录步骤采用通过基因重组技术克隆表达的点突变型RNase H活性缺失的M-MuLV反转录酶。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，与M-MuLV 相比，具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成，具有更高的检测效率和敏感度。
试剂盒组分(100次)：
gDNA Eraser-——————————————100μl
10×gDNA Eraser Buffer—————————100μl
5×TRUE RT MasterMix——————————400μl
RNase free H2O—————————————2ml
注意事项：
1. 避免RNase污染。
2. 为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3. gDNA Eraser 、5 × TRUE RT MasterMix非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。gDNA Eraser可以每次按照0.8μl使用，5 × TRUE RT MasterMix可以每次按照3.8μl使用，也不影响使用效果。
储存条件：-20℃，有效期1年。
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·细胞凋亡DNA Ladder抽提试剂盒(分离基因组DNA)
编号：ALH158
英文名称：Cells/Tissue Apoptosis DNA Ladder Extraction Kit
规格：20次|50次
本试剂盒选择性从组织和细胞中分离提取凋亡DNA ladder，通过选择性分离基因组DNA与凋亡DNA ladder，ZD限度的减少了基因组DNA对凋亡DNA ladder的观察干扰，因此显著的提高了检测敏感度，反应可在微量离心管进行，2.5小时完成，快速方便；无需有机抽提，检测灵敏度极高，可从约2000个凋亡细胞中检测到DNA ladder。推荐起始细胞量为5～10×10^5 个，但投入的细胞量可在1×10^5～5×10^6之间变化。原则是总细胞中应含有至少约1～2×10^4个凋亡细胞。多于2×10^4个凋亡细胞通常可获得十分清晰的凋亡DNA ladder。本试剂盒也可用于从组织中提取凋亡DNA ladder。但与培养细胞相比，整体动物组织凋亡细胞出现的时间、部位、程度等规律性差往往造成难以准确取材，可能显著影响实验结果。但只要组织确实发生凋亡，有经验的用户也可以使用本试剂盒从组织提取凋亡DNA ladder
试剂盒组份(50次)：
Extraction buffer ———10ml
10%SDS—————————1ml
Enzyme A————————1ml
Enzyme B————————1ml
Precipitant ——————7ml
为保持活性方便运输，Enzyme B 客户收到时为冻干粉，收到后加500μl 灭菌水（25 次）或者1ml 灭菌水（50次）溶解后－20℃保存。Enzyme A 和Enzyme B 为酶溶液，应该避免反复冻融降低活性，如果要分多次使用，按照每次使用量分装后－20℃保存。
注意事项
1. 溴化乙锭染色过度将降低DNA条带检测灵敏度，可用水冲洗凝胶10～30分钟。如冲洗过头可再用溴化乙锭复染。可用更灵敏的DNA染色剂SYBR Green。也可进行丙烯酰胺DNA凝胶电泳和DNA银染。
2. 对细胞进行干预处理后，凋亡可能仅在某一时间点或某一干预强度下最为明显。需要进行预试验确定ZJ干预时间或强度。此时也可用凋亡小体/hoeschst染色试剂盒(ALH160)快速染色凋亡小体观察。
3. 推荐起始细胞量为5～10×10^5 个，但投入的细胞量可在1×10^5～5×10^6之间变化。原则是总细胞中应含有至少约1～2×10^4个凋亡细胞。多于2×10^4个凋亡细胞通常可获得十分清晰的凋亡DNA ladder。六孔板的一个孔相当于一个35 mm培养皿长满后可得到1～10×10^5 个细胞，如果细胞凋亡发生率为10%，经过处理可得到约1～10×10^4个凋亡细胞，应该足以获得清晰的凋亡DNA ladder。反之如果不能从＞3×10^6个细胞获得清晰的凋亡DNA ladder，表明其中凋亡细胞少于1%。此时增加细胞用量也难已奏效。
4. 从组织块提取凋亡DNA ladder。取10～20 mg组织块放入小玻璃匀浆器，加100～200μl Extraction buffer，上下手动匀浆15～20次。取出匀浆液，冰上5～10 min。振荡10秒。4500 rpm 10分钟收集上清液并转移到新1.5ml离心管，执行提取步骤3。另外一种方法是将30～50mg组织剪碎后在PBS里面匀浆，制成细胞悬液，离心收集细胞后接步骤2继续执行提取。
5. 采用高质量琼脂糖，使用宽度较小和厚度较窄的样品梳子，制作较薄的琼脂糖凝胶(厚度约2～4 mm)；用较低的电压进行慢速电泳，将显著增加凋亡DNA条带检测灵敏度。电泳距离不要太长，否则将使小的凋亡DNA条带弥散而降低分辨率。
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·DNA消化试剂盒(DNase I)
编号：ALH044
英文名称：DNA digestion kit
规格：1500U
Dnase I中文名称为脱氧核糖核酸酶I，是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA后的产物，5"端为磷酸基团，3"端为羟基。DNase I活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成平末端，或1-2个核苷酸突出的粘末端。
经过本试剂盒独特的反应液消化后不需要繁琐的苯酚/氯*(代"仿")抽提灭活，可直接用于反转录反应，使用起来非常快速方便。
活性单位：37℃ 10分钟内，将能够完全降解1μg pBR322 质粒DNA 所需的酶量定义为1 个活性单位。
来源：大肠杆菌表达的31kd 重组蛋白。
酶贮存缓冲液：50 mM Tris-HCl (pH7.5)，10 mM CaCl2，50% (v/v)glycerol。
10×DNase Buffer：100 mM Tris-HCl (pH7.5 at 25℃)，25 mM MgCl2，1 mM CaCl2。
纯度：不含其它DNA 内切酶和外切酶，不含RNA 酶。
适用范围：制备不含DNA的RNA样品； RT-PCR反应前RNA 样品中去除基因组DNA 等可能的DNA污染；体外T7,T3,SP6等RNAPolymerases催化的RNA 转录后去除DNA模板；DNase I footprinting 研究DNA-蛋白质相互作用；缺口平移(nick translatioin)；产生DNA 随机片断文库；细胞凋亡TUNEL 检测中部分剪切基因组DNA 作为阳性对照。
反应体系与条件：
1.在RNAse free 管里面加入以下成分
RNA：＜3μg (＜8μl)
10×DNase Buffer：1μl
DNase I：1μl
RNase free water：Up to 10μl
2. 37℃孵育30分钟。
3. 加1μl EDTA Stopper。
4. 65℃孵育10 分钟，灭活DNase I。
4. 取适量或者全部10μl 的处理过的RNA 直接用于反转录。
注意事项：
每μl DNase I 最多处理不超过3μg RNA。如果需要RNA 较多，需要根据RNA 的处理量按比例放大DNase I、10×DNase Buffer 使用量和反应体积。如果处理后需要得到纯净RNA，可以使用RNA 清洁纯化试剂盒在第2 步后（37℃孵育30 分钟后）直接清洁纯化（不需要加EDTA Stopper 和65℃孵育10分钟的步骤了）。.jpg)
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