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登革热Panbio早期检测试剂盒 登革热Panbio试剂盒ELISA 登革热Panbio抗原检测试剂盒

产品信息
  • PANBIO 登革热Early ELISA检测试剂盒
     
    （我司同时有登革热，克锥虫，丝虫，非洲锥虫，恙虫，无形体，立次克体，基孔肯热，寨卡病毒，黄热病检测试剂盒，各种质控品，抗原，欢迎致电）
     
    预期用途
        Panbio Dengue EARLY ELISA 是一种登革热 NS1 抗原捕获 ELISA。 用于定性检测血清中的 NS1 抗原，辅助临床实验室诊断出现登革热临床症状的患者。 Panbio Dengue EARLY ELISA 应该与其它登革热血清诊断法联用。
    概述
        登革热病毒是黄病毒属，主要分布于热带和亚热带地区。世界上一半以上的人口居住于具有登革热潜在传播风险的地区，登革热是导致人类发病和死亡最严峻的虫媒病毒疾病。登革热病毒有 4 种不同但抗原相关的血清型，通过蚊（主要是埃及伊蚊、白纹伊蚊传播和波利尼西亚斑蚊）传播。
    （Panbio登革热）
        通过 ELISA 检测登革热 NS1 抗原是一种非常重要的方法，因为它能够在血清转化之前进行感染检测。 从发病后的第 1 天直到第 9 天都能在血清中检测到 NS1 抗原。这区别于 IgM 抗体，因为 IgM抗体直到发病后 3-5 天后才检测得到。继发性登革热病毒感染的特征是高 IgG 水平且其峰值检测窗口是在发病后的 6-15 天。这可能伴随着 IgM 水平升高。  
        Panbio Dengue IgG Capture ELISA 用于检测登革热感染的 IgG 抗体水平相对于阈值特异性升高。该试验不用于检测既往感染引起的低水平 IgG 抗体，这种情况通常见于地方性流行区的较多人群。 为了最为准确地从发病后的不同阶段诊断登革热患者，应该使用Panbio Dengue EARLY ELISA (01PE40)，Panbio Dengue lgM Capture ELISA (01PE20)和 PanbioDengue lgG Capture ELISA (01PE10)三者相结合的方法。
    检测原理
    血清中存在的登革热 NS1 抗原，与微孔板上聚苯乙烯表面附着的抗 NS1 抗体相结合。 洗去剩余的血清并添加 HRP 标记的抗 NS1 单克隆抗体。在培养完成后清洗微孔，再添加无色的底物系统 - 四甲基联苯胺/过氧化氢（TMB 显色液）。底物被酶水解后，TMB 显色液变蓝。用酸终止反应后，TMB 变黄。显色表示测试样本中存在登革热 NS1 抗原。
    （Panbio登革热）
    提供的材料
    1.  抗 NS1 抗体包被微孔板（12x8 孔）- 微孔板由抗 NS1 抗体包被。即用型。未使用的微孔应该立即重新密封并储存于干燥环境中。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。
    2.  HRP 标记抗 NS1 单克隆抗体– 1 瓶，15mL（ 橙色）。 辣根过氧化物酶（HRP）标记抗 NS1 单克隆抗体，含防腐剂（0.1% Proclin™）。即用型。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。
    3.  清洗缓冲液（20 倍） - 1 瓶，60mL 20 倍浓缩磷酸盐缓冲盐水（pH 7.2 – 7.6），含吐温 20 和防腐剂（0.1% Proclin™）。低温可能结晶。若去除结晶，可在 37℃孵育液体至澄清。混合均匀。用 19体积的蒸馏水稀释 1 体积的清洗缓冲液。稀释后的缓冲液可在 2-25℃储存一周。
     4.  样本稀释剂 – 1 瓶，22mL（ 棕色）。即用型。Tris 缓冲生理盐水（pH 7.2 – 7.6），含防腐剂（0.1%Proclin™）和添加剂。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。
    5.  TMB 显色液（TMB） - 1 瓶，15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢的混合物，存放于枸橼酸盐缓冲液中（pH 3.5 – 3.8）。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。
    6、7、8....
    需要但未提供的材料
    1.  精确、可调节的微量移液器，含一次性吸液头（5-1000μL 容积）
    2.  去离子水
    3.  标板清洗系统
    4.  酶标仪，含 450nm 滤波器
    5.  计时器
    6.  刻度量筒
    7.  烧瓶
    8.  用于稀释的试管或微滴定板
    注意事项
    用于体外诊断
    1.  在制备质控品的过程中使用的所有人源性材料已经过人类免疫缺陷病毒 1 和 2（HIV 1 和 2）抗体、丙肝（HCV）和乙肝表面抗原的检测，结果为阴性。但是，任何测试方法都不能完全确信，且所有人源性质控品和抗原都应按照潜在传染性材料处理。疾病控制和预防ZX以及美国国立卫生研究院建议将潜在传染原按照生物安全二级处理。
    2.  该测试只能使用血清执行。尚未建立使用全血、血浆或其它标本基质的方法。
    3.  不可使用黄疸或脂血症血清，以及出现溶血或微生物生长的血清。
    4.  不可加热，否则血清将失去活性。
    5.  在开始检测前所有试剂必须平衡至室温（20-25℃）。检测受温度变化的影响。微孔板在达到室温（20-25℃）之前不可从密封袋中取出。
    6、7、8....
    标本采集和制备
    静脉穿刺获取的血液应该置于室温（20-25℃）下直到凝块形成，再按照临床实验室标准化研究院（CLSI）的《认可标准——诊断用血液标本的静脉穿刺采集程序，H3》离心。
    应该尽快分离血清。如果在 2 天内不进行检测，血清应该 2-8℃冷藏或低于- 20℃冷冻储存。不推荐使用自解冻冷冻机储存血清。不推荐使用黄疸血清，以及出现溶血、脂血或微生物生长的血清。CLSI 提供了储存血液标本的建议，《认可标准——血液标本的处理加工程序，H18》。

    检测程序
    注：  确保所有试剂在开始测定前平衡至室温（20-25 ℃ ）。 在所给时间和温度范围以外进行测试可能产生无效的结果。不在预定时间和温度范围内的测试必须进行重复。
    质控品和样本预稀释
    1.  从铝箔袋中取出所需数量的微孔板并插入测试条槽。阳性质控品（P）、阴性质控品（N）和校准品（CAL）各需 5 个微孔，一式三份。 确保剩下未使用的微孔密封于含干燥剂的铝箔袋内。
    2.  使用适当的试管或微滴定板稀释阳性质控品、阴性质控品、校准品和患者样本。
    添加 75μL 样本稀释剂到 75μL 样本中。混合均匀。
    样本的ZZ稀释度是 是 1:2.
    请勿旋转质控品。 质控品包含甘油。 确保稀释后的质控品适当混合均匀。通过倒置或轻轻地用吸管搅拌充分混匀。 旋转不起作用。
    ELISA  程序    （Panbio登革热）
    1.  吸取 100μL 稀释的测试样本和质控品添加至对应的微孔中。
    2.  盖住测定板并在 37℃ ± 1℃孵育 1 小时。
    3.  用稀释后的清洗缓冲液洗 6 次（参考清洗程序）。
    4.  吸取 100 μL HRP 标记抗 NS1 单克隆抗体添加到每个微孔中。
    5.  盖住测定板并在 37℃ ± 1℃孵育 1 小时。
    6.  用稀释后的清洗缓冲液洗 6 次（参考清洗程序）。
    7.  吸取 100μLTMB 添加到每个孔中。
    8.  在室温（20-25℃）下孵育 10 分钟，从DY次添加开始计时。蓝色将会显现。
    9.  按照相同顺序吸取 100μL 终止液添加到每个孔中，计时同 TMB 添加步骤。混合均匀。蓝色将变成黄色。
    10. 在 30 分钟内读取每个孔在 450nm 波长的吸光度，参考滤波器为 600-650nm。
    注： 如果使用双波长分光光度计，将参考滤波器设定在 600-650nm 之间。在没有参考滤波器的情况下读取 450nm 的微孔结果可能由于背景原因导致吸光度偏高。
    清洗程序
    为了清除未复合的样本或成分，有效清洗是 ELISA 程序的关键步骤。
    A.  自动洗板机
    (1) 彻底抽净所有微孔。
    (2) 在清洗循环期间将每个孔装满至边缘（350μL）。
    (3) 完成 6 次清洗后，将测定板倒立于吸水纸巾上用力敲打，确保清除所有清洗缓冲液。
    (4) 为了确保有效清洗，必须维持自动洗板机良好的保养。必须始终遵守厂商的清洁说明。
    B.  手动清洗
    (1) 将测定板的内含物丢弃到适当的废物容器。
    (2) 用适当的挤压瓶将微孔填满清洗缓冲液。避免清洗缓冲液起泡，否则会降低清洗效率。立即丢弃微孔里的清洗缓冲液。
    (3) 再将微孔填满清洗缓冲液，并立即丢弃。
    (4) 重复步骤（3）4 次，共用清洗缓冲液清洗六（6）次。
    (5) ZH一次清洗完成后，丢弃微孔的内含物并将测定板置于吸水纸巾上敲打，以确保清除所有清洗缓冲液。
    质量控制
    每个试剂盒包含校准品，阳性质控品和阴性质控品。这些组成的可接受值参见附带的规格表。阴性质控品和阳性质控品用于监测重大的试剂失败。阳性质控品不能确保测定临界值的精密度。如果质控品或校准品的任一吸光度读数不符合规定，则测试无效且必须重新测试。如果测试无效，则不能报告患者结果。
    运算
    重要提示：校准系数是针对批次的，详见规格表。在开始计算之前获取校准系数值。
    1. 计算校准品三份平行试样的吸光度平均值，乘以校准系数，得出临界值。
    2. 用样本吸光度除以（第 1 步得出的）临界值，计算指数值。
    或者，
    3. 用（第 2 步得出的）指数值乘以 10，计算 Panbio 单位。
    指数值 =  样本吸光度/ 临界值
    例如：  样本 A 吸光度=0.949
    样本 B 吸光度=0.070
    校准品的平均吸光度=0.802
    校准系数=0.62
    临界值=0.802x0.62=0.497
    样本 A 的指数值 （0.949/0.497） = 1.91
    样本 B 的指数值 （0.070/0.497） = 0.14
    Panbio  单位 = 指数值 x 10
    样本 A 的 Panbio 单位 1.91x10 = 19.1
    样本 B 的 Panbio 单位 0.14x10 = 1.4
    结果判读
    利用来自澳大利亚、洪都拉斯和泰国的地方性和非地方性人群测定出临界值。
    登革热感染诊断 ： Panbio Dengue EARLY ELISA 对患者血清内含有的登革热 NS1 抗原进行评估。阳性结果（>11 Panbio 单位）提示活动性原发或继发登革热感染。 如果需要区分原发性和继发性感染，则应使用 Panbio Dengue IgM Capture ELISA (01PE20) 和 Panbio Dengue IgG Capture ELISA (01PE10)。
    阴性：检测不到登革热 NS1 抗原。结果不排除登革热病毒感染。 该样本需进行血清学检测。 若该样本为阴性但仍疑似登革热感染，则应该进行后续的样本采集和血清学检测，检测时间不要超过初次样本采集后 14 天。
    不确定:结果不确定的样本应该重新检测。重复检测后结果仍不明确的样品应采用其它方法重复检测或重新收集另一份样品。
    阳性:检测到存在登革热 NS1 抗原。应该对后续样本进行登革热血清检测进行确诊。
    以下是建议报告所获结果的方式：Panbio Dengue EARLY ELISA 的结果如下所示。不同方法获得的结果可能无法互换使用。大于临界值的测定结果量值不代表总的抗原量。结果应该报告为阳性、阴性或不确定，而不是一个数值。
    测试的局限性
    1.  必须结合患者的临床体征和症状来做临床诊断。该试剂盒的结果本身并没有诊断作用，应该与其他临床数据和患者症状联用。
    2.  不可用于筛查普通人群。阳性预测值取决于病毒存在的可能性。只能检测有临床症状或疑似接触过相关病毒的患者。
    3.  黄病毒属疾病（即登革热 1、2、3 和 4、墨累山谷脑炎、日本脑炎、黄热病病毒和西尼罗河）之间的血清学交叉反应是常见的。在确诊之前必须排除这些疾病。
    4.  尚未确定目测结果判定的性能特征。
    5.  Panbio Dengue EARLY ELISA 检测结果为阳性的所有血清必须送到参考实验室进行登革热阳性确认和流行病学记录。
    6.  Panbio Dengue IgM Capture ELISA (01PE20)和Panbio Dengue IgG Capture ELISA (01PE10)是IgM和 IgG 测定最方便的方法。它们都采用了相同的捕获方法，因此使用共同的方法及血清稀释剂可同时检测出 IgM 和 IgG。 这两种方法还可以用来推测性地区分原发性和继发性的登革热感染。
    预期值
    只有在发病的初期，也就是出现临床迹象后 1-9 天，可在患者血清中检测到登革热 NS1 抗原5,6,7 。一旦产生抗 NS1 IgG 抗体（通常与退烧相对应），血清中将检测不到 NS1。 Panbio Dengue EARLY ELISA 只是急性活动期感染的一个标记法。在检测窗口外，必须采用其它血清检测对登革热感染进行诊断。
    原发性登革热感染的特征是感染发作 3-5 天后出现显著或不断上升的 IgM 水平，能够持续 3-5 个月。 继发性登革热病毒感染的特征表现为早在感染发作后第 3 天便可检测到高 IgG 水平，同时可能伴随 IgM 水平升高。在早期感染及某些继发性感染中，可检测到的 IgM 抗体水平可能偏低。然而，Panbio DengueEARLY ELISA 有助于检测早期血清中存在的抗原。在症状持续的情况下，建议在获取DY份标本后的 14天内重新对患者进行检测。
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