蛋白质组学定量分析

 
细胞内蛋白质组丰度的动态变化对各种生命过程有重要影响。例如在许多疾病的发生和发展进程中，常常伴随着某些蛋白质的表达异常。
定量蛋白质组学就是把一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂的混合体系中所有的蛋白质进行精确的定量和鉴定。目前定量蛋白质组学技术主要分为标记(label)策略和非标记的(label free)定量策略,其中标记策略又分为体内标记(如 SILAC、¹⁵N 标记)，以及体外标记(如 iTRAQ、TMT 标记) 。



服务介绍
SILAC即细胞培养条件下稳定同位素标记技术(Stable Isotope Labeling By Amino Acids In Cell Culture,SILAC)，其实验原理是在细胞培养基中加入轻、中或重型稳定同位素标记的必需氨基酸(赖氨酸和精氨酸)，通过细胞的正常代谢，使新合成的蛋白带上稳定同位素标签。等量混合各类型蛋白质,酶解后进行质谱分析。通过比较一级质谱图中同位素峰型的面积大小进行相对定量，同时二级谱图对肽段进行序列测定从而进行蛋白鉴定。

技术路线



技术优势

• 标记率高：活细胞水平标记技术,标记效果稳定，其标记效率不受裂解液的影响。标记效率可高达100%。
• 灵敏度高：样本需求量少，通常每个样品只需要几十微克的蛋白量。
• 通量高：采用质谱定量，可同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质。
• 精度高：多个样品混合后同时进行分离、酶切和鉴定，后续实验对样品的影响是一致的，减少了实验操作和仪器设备产生的影响，具有更高的精密度和重现性。
• 活性高：标记采用的是体内标记技术，更接近样品真实状态

服务介绍
iTRAQ (Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation)即等重标签标记用于蛋白质相对和JD定量技术。它是美国Applied Biosystems公司研发的蛋白质组定量专利技术。该技术可实现对多种不同样品中蛋白的比较，如用于研究不同病理条件下或者不同发育阶段的组织样品中蛋白质表达水平的差异。

iTRAQ试剂


技术路线




技术优势

• iTRAQ 可于一次实验中同时标记 4 至 8 个的样品，操作简单快速，减少多次质谱检测中产生的系统误差。适用于对多个样品进行高通量的检测，实验设计更加灵活。
• iTRAQ 是在肽段水平上进行的体外标记，几乎适用于所有类型的生物样本。
• 重现性好、灵敏度高、定性与定量可同时进行。
• 检测限低，可检测出低丰度蛋白。
• 报告离子的相对分子质量较低，定量分析结果更加灵敏可靠。
• 在样本中加入 iTRAQ 试剂标记的已知量的标准蛋白, 可实现JD定量研究。

 

服务介绍
研究发现蛋白质丰度与质谱数据一级谱图肽段峰强度或二级谱图数目呈现一定相关性，使无标记定量成为了定量蛋白质组学的另一有效方法。无标记定量在一定程度上可以克服标记定量方法的缺点，在单次实验中可定量蛋白质提取方法主要有两大类：基于一级谱图母离子强度，如谱图峰高、谱图峰面积和谱图峰容量等,称为信号强度法；基于肽段匹配的二级谱图数目，称为谱图计数法。
 
技术流程



服务优势

• 无需昂贵的同位素标签做内部标准，实验耗费低。
• 对样本的操作最少，从而使其最接近原始状态。
• 不受样品条件的限制，克服了标记定量技术在对多个样本进行定量方面的缺陷。
• 对实验操作稳定性、重复性要求高，要求至少做三次技术重复或生物重复；
• 准确性较标记定量差，对液相色谱串联质谱的稳定性和重复性要求较高。

同位素标记和非标记定量的比较




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