普氏立克次体（RP）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

1）普氏立克次体（RP）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）技术原理
       DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
       在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
       发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。
2）普氏立克次体（RP）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）普通PCR反应流程
                                        
3）反应原理
                     
4）PCR循环
                            
5）与荧光定量PCR技术相比较主要缺点。                          
普氏立克次体（RP）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）荧光PCR简述
       定义：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化，通过仪器软件实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线实现对起始模板的定量分析。
      荧光PCR检测分为两种方法：荧光探针法和荧光染料法。
      荧光探针法检测原理：
              
荧光PCR如何实现实时监控的呢？
Ø       PCR反应体系中加入荧光染料
Ø       所有的定量PCR仪器都有三个共同的组成部分（检测器、激发光源、热循环模块）
Ø       在扩增过程中，荧光信号随着PCR产物的增加而增强
Ø       每个循环结束后，定量PCR仪器通过光学系统记录荧光信号的增加
Ø       PCR软件计算出数据，用于实验结果的分析
     ARMS检测方法；1个SNP位点设计双管反应，含目的基因检测及内参检测双通道。  
普氏立克次体（RP）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）技术特点：
Ø       准确可靠，临床双盲对照试验＞1000例，结果与金标准测序法比对，结果一致性大于99%。
Ø       高灵敏：可检测低至10ng的人基因组DNA。
Ø       快速：整个检测流程只需3小时。
Ø       简便：试剂盒提供预混好的试剂，使体系配置操作简便。
Ø       防污染
Ø       高特异性：双重特异性组成，保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对，才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对，在延伸中产生荧光。
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