条件性基因敲除（组织特异性基因敲除）小鼠服务（ES打靶）

建立在传统基因打靶技术之上的TurboKnockout基因敲除技术，不仅具有传统ES打靶技术成熟、修饰准确、效果稳定等优点，更是使得传统ES打靶技术减少两代繁育时间，制作周期缩短至仅需6个月。在核酸酶技术（TALEN/Cas9）尚未成熟之前，TurboKnockout技术将是研究者ZJ的选择。

传统ES打靶基因敲除：构建周期长达12个月，存在嵌合体阶段

传统ES打靶基因敲除因嵌合体阳性率较低，并且需要与工具鼠交配才能获得删除Neo的杂合子，因此构建周期长达10-12个月。如何跨越“嵌合体”阶段并自删除Neo以减少两代繁育时间，才是真正快速的关键。

TurboKnockout基因敲除：实现跨越“嵌合体”阶段且自删除Neo，减少两代繁育时间

基于ES打靶技术的TurboKnockout技术采用了独特的建系和基因改造技术，建立了具有GX遗传优势的TurboKnockout ES细胞系，通过特定胚胎发育阶段的显微注射，使TurboKnockout ES细胞100%代替內源ES细胞，从而实现跨越“嵌合体”阶段，把ES打靶构建周期缩短至6-8个月。并且TurboKnockout采用独特的Self-deleting Neo Cassette所获得的TurboKnockout小鼠与任何品系小鼠交配，都可以100%自删除Neo。也就是说，TurboKnockout不仅实现跨越“嵌合体”阶段，还能真正自删除Neo，从而快速获得去除Neo的杂合子小鼠。

TurboKnockout 技术对比：

TurboKnockout 技术优势：

1、基因修饰准确、效果稳定；

2、没有脱靶效应，可胜任复杂的基因敲除；

3、自删除Neo可进一步缩短服务周期，简化了小鼠交配流程。

服务流程

 服务周期对比

小鼠品系

ES细胞品系：C57BL/6N

TurboKnockout 条件性基因敲除小鼠
  

条件性基因敲除是通过把两个LoxP位点插入到目的基因的一个或几个重要外显子的两端以制备出有两个loxP位点的TurboKnockout-floxed小鼠，TurboKnockout-floxed小鼠在与表达Cre重组酶小鼠杂交之前，目的基因表达完全正常；而当TurboKnockout-floxed小鼠与组织特异性表 达Cre酶的小鼠进行杂交后，可以在特定的组织或细胞中敲除该基因，而该基因在其它组织或细胞表达正常。

应用

1、用于具有胚胎致死性目的基因的研究；

2、用于研究基因在特定的组织或细胞中的生理病理功能；

3、与控制Cre表达的其它诱导系统相结合，还可以对某一基因的表达同时实现在时间和空间两方面的调控。

 

建系原则与流程

1、与Cre小鼠杂交：TurboKnockout-floxed小鼠与组织特异性的Cre小鼠杂交，获得去除Neo抗性且单条染色体有缺失的阳性F1代组织特异性cKO杂合子小鼠（+/-）；

2、挑选一对F1 代小鼠进行自交， 通过 PCR 鉴定筛选得到组织特异性去除基因的F2代cKO纯合子小鼠（-/-）。