ALH339 平末端载体连接试剂盒(含多克隆位

规格：20次|40次

编号：ALH339

英文名：Zero background flat end fast connection kit(with mcs)

品Pai：百奥莱博

产地：国产|进口

本试剂盒是一种先进的自杀基因阳性选择克隆系统，可以GX克隆平末端PCR产物和任何具有平末端的DNA片段。该试剂盒对磷酸化或非磷酸化的 DNA片段都有效。 阳性选择载体和插入片段连接仅需5分钟即可获得超过95%的阳性重组克隆。由具有校正活性的聚合酶（如：Pfu polymerase）扩增的平末端 PCR 产物可直接连入克隆载体。连接产物可直接转化常用的大肠杆菌菌株。



试剂盒提供一个新颖的自杀基因阳性选择克隆载体t。该载体含有致死的自杀基因（内含多克隆位点），当载体与片段连接成功，自杀基因无法正确表达，包含重组子的细胞可以正常生长；当载体与片段连接不成功，载体自连后自杀基因正确表达，包含自连空载体的细胞无法存活，即“零ZERO”背景。这种阳性筛选策略无需蓝白斑筛选，极大地加速了克隆筛选进程。



为方便酶切作图和插入片段基因操作，本试剂盒克隆载体的多克隆位点两侧各包含一个BglII识别序列。此外，该载体含有T7启动子，可用于体内或体外转录、插入片段测序等研究。



试剂盒组份(20次)：

平末端载体(40ng/μl)——————————————20μl

900bp Control（40ng/μl）————————————5μl

2×Quick Ligation Buffer-————————————100μl

T4 DNA ligase（5U/μl）—————————————20μl

Forward Sequencing Primer (10μM)————————50μl

Reverse Sequencing Primer (10μM)————————50μl

注：

forward sequencing primer, 23-mer 5’-CGACTCACTATAGGGAGAGCGGC-3’

reverse sequencing primer, 24-mer 5’-AAGAACATCGATTTTCCATGGCAG-3’



储存条件：-20℃，有效期6个月。



本品别名：平末端载体连接试剂盒（含多克隆位点）(T4连接酶技术)|平末端克隆试剂盒



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·石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒

编号：ALH074

英文名称：Paraffin Embedded Tissues microRNA Extraction Kit

规格：50次

本试剂盒用于快速从福尔马林固定、石蜡包埋组织样品中提取RNA包括microRNA。独特的裂解液/蛋白酶K迅速裂解细胞释放出RNA，然后裂解混合物通过一个基因组DNA清除柱，基因组DNA被清除而RNA穿透滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。得到的RNA可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。



产品组分：

裂解液——————15ml

结合液——————25 ml

漂洗液——————10ml

蛋白酶K——————20mg（可选）

RNase-free H2O——————10ml

基因组DNA清除柱和收集管——————50套

RNA吸附柱和收集管室温——————50套



产品特点：

1.完全不使用有毒的苯酚，氯*(代"仿")等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2.快速，简捷，单个样品RNA提取操作一般可在1小时内完成。

3.试剂盒的独特基因组清除柱和配方确保有效清除基因组DNA残留，一般情况下得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。

4.多次柱漂洗确保RNA高纯度，可直接用于下游各种实验。



注意事项：

1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2. 样品处理量不要超过基因组DNA清除柱和RNA吸附柱处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大，例如胸腺脾脏DNA含量丰富，超过5mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富，超过3x106细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，如不超过2个10μm厚度石蜡切片。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。

3. 裂解液PKD、结合液RBC中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4. 预防RNase 污染，应注意以下几方面：

1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase 污染。

2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。

3) RNA提取过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。

4) 配制溶液应使用无RNase 的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC 至终浓度0.1%( v/v)，37℃放置过夜，高压灭菌。）

5. 关于DNA 的微量残留：

一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留（DNase 消化也无法做到无残留），本试剂盒采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA 清除柱技术，绝大多数DNA 已经被清除，可直接用于反转录PCR 和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：

1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA 中的连接区,这样DNA 就不能作为模板参与扩增反应。

2) 选择基因组DNA 和cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。

6. RNA 纯度及浓度检测：

完整性： RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE 电泳缓冲液；150v，15 分钟)检测完整性。由于石蜡包埋组织福尔马林固定和包埋过程中一般由于RNA 与蛋白反应交联会导致RNA 断裂或者降解，一般电泳后UV下只能看到模糊弥散（smear）带型，随着储存的时间越长，降解断裂越严重，甚至只能看到峰值仅仅在100bp 左右的模糊条带。这都属于RNA 提取正常情况。

纯度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA，OD260/OD280 读数（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯。

浓度：取一定量的RNA 提取物，用RNase-free 水稀释n 倍，用RNase-free 水将分光光度计调零，取稀释液进行OD260, OD280 测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数n)×40。



储存条件：室温，有效期9个月。





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·改良Bradford法蛋白定量试剂盒

编号：ALH375

英文名称：Protein Quantitation Kit By Bradford

规格：1000次|2500次

本试剂盒是在世界上常用的蛋白浓度检测方法之一Bradford法基础上（考马斯亮蓝结合显色法）改进而成。当Bradford染色液（考马斯亮蓝）和蛋白在酸性条件下结合时，Z大吸光值波长立刻由465 nm转移至 595nm，同时颜色由褐色转为蓝色，通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值，推算出蛋白浓度。



试剂盒组份(1000次)：

蛋白标准（5mg/ml BSA）—————1ml

Bradford染色液—————————200ml



产品特点：

1.灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，Z小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1-20μl。

2.检测速度极快，10-20个样品只需不足10分钟即可完成。

3.在50-1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。



注意事项

1. Bradford 染色液含有刺激性或者腐蚀性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

2. Bradford 染色液中考马斯亮蓝易聚集成团，每次使用前请颠倒6～8 次并且竖直抓住瓶口做水平划圈动作，旋转瓶中液体，帮助充分混匀，但不可以上下振荡混匀。

3. 低温会降低Bradford 染色液的敏感度，因此每次使用前应该使Bradford 染色液回复到室温。仅仅将需要的Bradford 染色液复温，可以减少复温时间。倒出每次需要的Bradford 染色液回复到室温，将原瓶放回冰箱。

4. 蛋白标准请在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。标准品曲线配制时，如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小，可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制，或者使用精确度高的加样枪。

5. 由于Bradford 法在蛋白浓度ZG到一定时候，颜色反应并不成比例增加，因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线，每次应按照实际测得的标准曲线计算出大致精确的蛋白浓度。

6. 需要酶标仪一台，检测波长为595nm，也可以在570-610nm 之间波长测定，但会降低一些敏感度；并需96 孔板。如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但是测定蛋白浓度时，需根据测定吸光度的杯子的体积，按比例调整Bradford 染色液和样品的体积。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。

7. Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS 低于0.125%，Triton X-100 低于0.125%，Tween 20 低于0.06%。可以考虑用超纯水稀释，透析/除盐，ACETONE/TCA 沉淀蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。



储存条件：-20℃，有效期9个月。





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BTN131046 n-十二烷基-β-D-麦芽糖苷 n-Dodecyl-β-D-Maltoside

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PY04-088  抗生素溶液  5ml/支  每支添加于95ml Bolton肉汤基础中，用于弯曲杆菌的选择性分离培养

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