G418-R MEF G418-R MEF细胞

 

G418-R MEF细胞冻存时使用的DMEM培养基，复苏时使用MEM培养基，第二天发现复苏不成功，细胞没有贴壁，我又重新离心之后加入DMEM培养基，请问大神对细胞有影响吗？？之后是否可以贴壁生长？

资源名称 G418-R MEF

种属 G418抗性的小鼠胚胎成纤维细胞，经mitomycin-C处理，P3,300万细胞（干细胞库保藏）

类型 取孕12.5天的neo转基因C57小鼠的胚胎制备后经过射线处理

形态 成纤维细胞

培养方法

培养基 MEF细胞完全培养基（100 ml）： DMEM (Invitrogen, 12430) 88 ml FBS (Biochrom, S0115) 10 ml Glutamax (Invitrogen, 35050) 1 ml Non-essential Amino Acids, 100×(Invitrogen, 11140) 1 ml 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度。

这两个培养基成分差距不大，大部分细胞换用应该没什么影响。G418-R MEF细胞复苏不贴壁的话可能是：1.冻存细胞有问题，比如冻存细胞状态不是很好，冻存降温过快等；2.复苏细胞有问题，比如融化速度过慢，离心时间和转速有问题；3.细胞本身特性，有些细胞贴壁很慢，过夜不一定会都贴壁，这种情况不动是的，再离心的话细胞贴壁只会更慢。

G418-R MEF细胞爬片的步骤：

1 什么是细胞爬片？其用途是什么？

2 细胞爬片的步骤是怎样的？

3 细胞爬片需要哪些实验材料和仪器？

细胞爬片就是让细胞（贴壁细胞）在片子（盖玻片）上生长。主要用来做免疫细胞化学啊，原位杂交等吧。在做这些实验时，制作标本有两种，一是离心做细胞涂片，二是细胞爬片。利用贴壁G418-R MEF细胞在玻璃等物质上贴壁生长的特点，让它在盖玻片上生长，可以使制作的细胞片子更牢固，在后面的洗涤过程中，不易脱落。特别是在用粘附剂如多聚赖安酸处理过的片子上，细胞贴得更牢固。

细胞爬片：将片子放在细胞培养板（均已经消毒）中，加入一定数量的细胞悬液，让它生长24小时。待它贴壁后，细胞爬片就制作好了。

需要的器材：多聚赖安酸、合适大小的盖玻片（根据细胞培养板孔大小而定）、细胞培养板、培养基。

 

Hela（人宫颈癌细胞） 5×10?cells/T25培养瓶

HEC-1-B（人子宫内膜腺癌细胞） 5×10?cells/T25培养瓶

B16-F1（小鼠黑色素瘤细胞） 5×10?cells/T25培养瓶

MC3T3-E1 Subclone 14（小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14） 5×10?cells/T25培养瓶

HEC-1-A（人子宫内膜腺癌细胞） 5×10?cells/T25培养瓶

AML-193（人急性单核细胞白血病单核细胞） 5×10?cells/T25培养瓶

HCT-8 [HRT-18]（人回盲肠癌细胞） 5×10?cells/T25培养瓶

HCT-15（人结直肠腺癌细胞） 5×10?cells/T25培养瓶

A7r5（大鼠胸大动脉平滑肌细胞） 5×10?cells/T25培养瓶

HCT 116（人结肠癌细胞） 5×10?cells/T25培养瓶

A3（人T淋巴细胞白血病细胞） 5×10?cells/T25培养瓶

HCCC-9810（人胆管细胞型肝癌细胞） 5×10?cells/T25培养瓶

2V6.11（人胚肾细胞） 5×10?cells/T25培养瓶

HCC827（人非小细胞肺癌细胞） 5×10?cells/T25培养瓶

LLC-WRC 256（大鼠腹水癌细胞） 5×10?cells/T25培养瓶

293FT（人胚肾细胞） 5×10?cells/T25培养瓶

HCC1937（人乳腺癌细胞） 5×10?cells/T25培养瓶

HBZY-1（大鼠肾小球系膜细胞） 5×10?cells/T25培养瓶