慢病毒和腺病毒表达系统

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        借助于病毒颗粒作为基因的载体，利用病毒的侵染特性，自发的侵染哺乳动物细胞，将目的基因导入哺乳动物细胞中，以完成目的产物的超量表达或干涉。该技术目前在基因、小RNA、转录因子等功能验证领域以及重组蛋白表达、转基因哺乳动物制备等领域作为一种主要的技术手段被广泛使用。该技术体系主要由病毒包装和病毒侵染筛选两个部分组成（如图所示）。病毒包装就是借助基因工程的方法将目的基因片段与人为改造病毒的基因组通过特殊的位点连接起来形成重组病毒基因组以及重组病毒制备的过程，常规使用的病毒包装系统有慢病毒包装系统和腺病毒包装系统。包装好的慢病毒和腺病毒都可以自主的侵染哺乳动物细胞，导入外源基因。

 

 

    慢病毒包装系统采用的是人工改造过后的HIV病毒系统，包括1个表达质粒和多个辅助质粒，通常采用293T细胞作为宿主繁育病毒，包装好的重组病毒侵染细胞，会将目的基因随机、稳定的插入宿主细胞基因组，实现目的基因稳定、长期的表达目的产物。腺病毒表达系统采用的是人工改造过后的Ad5病毒系统，通常包括1个表达质粒和1到多个辅助质粒，通常采用293细胞作为宿主繁育病毒，包装好的重组病毒侵染细胞，目的基因游离于宿主细胞基因组独立表达，可实现目的产物快速、高丰度的表达，同时避免因为基因整合而产生的基因突变现象。尽管慢病毒表达系统和腺病毒表达系统在实验中被广泛应用，但是这两种不同的表达系统在动物和细胞实验中具有不同的使用范围，产生的效果也存在很大的差异（如表1所示）。

表1：慢病毒表达系统和腺病毒表达系统的特点和区别

名称	慢病毒表达系统	腺病毒表达系统
病毒基因组	RNA	DNA
原始病毒	人类免疫缺陷I型病毒（HIV）	人5型腺病毒（AD5）
载体系统	1个表达载体以及多个辅助载体	1个表达载体以及1到多个辅助载体
包装细胞	293T细胞	293细胞
病毒包装方式	表达载体和辅助载体共转包装细胞获得重组病毒颗粒。该过程不裂解细胞，病毒会在细胞培养液上清中大量聚集。	表达载体和辅助载体共转包装细胞获得重组病毒颗粒。裂解细胞获得重组病毒颗粒。
是否整合到宿主基因组	是	否
表达丰度	高丰度表达	高丰度表达
表达时间	慢（2-4天）	快（1-2天）
病毒滴度‍‍‍‍‍‍‍‍‍	1*108~1*1010TU/ml	1*1011~1*1013TU/ml
克隆容量	≤6kd	≤8kd
免疫原性	弱	强
侵染效率	低	高
过表达目的蛋白	适合	适合
过表达microRNA	适合	不适合
RNAi	适合	适合
稳定转化细胞或动物	适合	不适合
活体动物实验	不太适合	适合
细胞侵染实验	分裂或非分裂的哺乳动物细胞，对神经细胞等感染效果差。	分裂或非分裂的哺乳动物细胞，对细胞类型无选择性。

武汉云克隆的病毒服务项目包括：基因钓取、RNAi设计、病毒包装、超量和干涉稳定细胞株建立以及表达/干扰检测等一站式服务。除此之外，根据不同客户需求的不同，我们还可以提供个性化的定制服务。

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