埃博拉病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

埃博拉病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)问：荧光实时定量PCR，目的基因CT值好大，从31到33都有，CT值出现比较晚，我做了梯度稀释，还是这样，但是内参就是CT值23左右，这是为啥啊？溶解曲线也很好，单峰，有没有知道这是为什么？难道是目的基因引物有问题？

埃博拉病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)答：怀疑引物有问题，可以先检测引物的扩增效率。严格的qPCR，首先就是验证引物的扩增效率，之后决定要不要用。CT值大，另外一个常见原因是目的基因在实验细胞或组织中的表达量相对较低。内参基因的表达，一般来说是比较高的。

CT值大，往往是表达量相对较低，RT时RNA的模板要加足，qPCR时建议增加目的基因PCR管的模板量，不用严格遵照qPCR的Protocol，将Protocol中加水补足体积的水换成模板cDNA。

初学者对埃博拉病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)数据如何用：

假设干预组和对照各有30个样本，此处先不考虑PCR跑三重的技术重复。我们可以任意设置一个对照组的△CT（即为感兴趣基因与内参基因CT值相减）作为Calibrator，其RQ为1，其余的对照组样本包括干预组样本也都和这一个Calibrator相比，这样会得到两组RQ值即两组相对表达倍数，就是统计这两组的RQ值有无差异即可，PCR试剂盒如果有差异，再算FOLD change， 埃博拉病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)就是用干预组RQ值的均数比上对照组RQ值的均数。且这个均数可能是中位数或者平均数根据RQ分布的不同，如果是非正态分布，则可以对RQ做对数转换，然后比较两组对数转换后的RQ值看有无差异即可，此时即可用参数检验方法来统计了！XY-11-836 羊源性成分核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 荧光定量PCR目的：在PCR反应中，无论是定性还是定量分析，分析的都是PCR的终产物。但是有时候想知道的却是未经PCR放大之前的起始模板量，RT-PCR应用而生。

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