“NCI-H1975人肺腺癌细胞/人非小细胞肺腺癌细胞”

  
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 细胞培养注意事项问题解答
  细胞培养技术解答
问题5：悬浮细胞成簇
可能原因
（1）培养液中含钙、镁离子
（2）支原体污染
（3）蛋白酶过度消化使得细胞裂解释
（4）DNA污染
建议解决方法
（1）用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。
（2）分离培养物，检测支原体。如发现支原体污染，丢弃培养物。
（3）用DNase I处理细胞。
问题6：原代细胞培养物污染
可能原因
原代培养组织在进入培养前已污染
建议解决方法
培养前用含高浓度抗生素的平衡盐溶液反复冲洗组织。
问题7：培养细胞生长减慢
可能原因
（1）由于更换不同培养液或血清
（2）培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏。
（3）培养物中有少量细菌或真菌污染
（4）试剂保存不当
（5）接种细胞起始浓度太低
（6）细胞已老化
（7）支原体污染
建议解决方法
（1）比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验。让细胞逐渐适应新培养液。
（2）换入新鲜配制培养液，或补加谷氨酰胺及生长因子。
（3）用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物。或用抗生素CJ。
（4）血清需保存在-5℃到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清完全培养液在2-8℃保存，并在2周内用完。
（5）增加接种细胞起始浓度。
（6）换用新的保种细胞。
（7）分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。
问题8：培养细胞死亡
可能原因
（1）培养箱内无CO2
（2）培养箱内温度波动太大
（3）细胞冻存或复苏过程中损伤
（4）培养液渗透压不正确
（5）培养液种有毒代谢产物堆积
（6）更多原因参考问题4和问题7
建议解决方法
（1）检测培养箱内CO2
（2）检查培养箱内温度
（3）取新的保存细胞种
（4）检测培养液渗透压。注意：大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为260– 350 mOsm/kg。加入额外试剂如HEPES或药物都有可能影响培养液渗透压。
（5）换入新鲜培养液
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