RFT086 Western封闭液I(BSA)

规格：100ml

编号：RFT086

品Pai：百奥莱博

● 产品简介：

Western Blot 实验中，为防止印迹膜与检测系统中的蛋白成分（如抗体 IgG 等）发生非特异性吸附，导致实验结果不清晰，通常在进行一抗孵育前需预先对印迹膜上的非特异结合位点进行封闭。

本产品以BSA为基础，采用独特配方，可快速GX地封闭膜上多余的结合部位，减少非特异结合情况的产生，降低背景，适用于各种转印膜的封闭，操作方便快捷。

另外，本产品特别添加了蛋白稳定剂，可保证每次实验封闭效果稳定可靠。

● 贮存： 2-8℃贮存，有效期半年。

● 注意事项：1 由于BSA中含有微量牛IgG，其结构与羊（goat and sheep）IgG极其类似。因此来源于羊的一抗或二抗能与牛IgG交叉反应，产生高背景。因此该封闭液不推荐用于羊来源的一抗或抗羊的二抗。

2 该封闭液适用于streptavidin/biotin系统以及AP底物检测系统。

● 使用说明：1. 本产品无需稀释，开盖即用。

2. 目的蛋白转移完毕后，将印迹膜放入容器中，加入适量Western封闭液I（以完全覆盖印迹膜为宜） 。

3. 室温孵育30分钟至2小时，必要时可4℃孵育过夜。

4. 封闭结束后弃去封闭液，进行Western Blot后续操作。



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·植物基因组提取试剂盒

编号：RFT038

规格：50次

● 储存条件和效期：本试剂盒在室温（25℃左右）干燥条件下，可保存1年；更长时间的保存可置于2–8℃。2–8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。单独包装的RNaseA收到后-20℃保存。

● 产品简介：

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，能提取多种植物细胞/组织中的基因组DNA。离心吸附柱可以GX、专一吸附DNA，可Z大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。

使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

● 提取得率：材料 DNA得量（μg/100mg）

Arabidopsis 3–4 μg

Barley 8–12 μg

Maize 15-20

Pine 20-25

Potato 4-6

Rape 2-4

Spinach 5-10

Tobacco 20-25

Wheat 25-30

● 准备工作：1. 准备液氮；65℃水浴；无水乙醇；1.5ml灭菌离心管。

2. 按照标签所示在缓冲液AP3和漂洗液PW中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。

3. 每次使用前请检查缓冲液AP1，缓冲液AP2和缓冲液AP3是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

● 操作步骤：如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1. 取适量植物新鲜组织500mg-1g加入液氮充分研磨，取约100mg粉末置于1.5ml离心管中，加入400 μl 缓冲液AP1和6 μl RNaseA (10mg/ml)，漩涡震荡1分钟。

2. 将离心管放在65℃水浴10分钟，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。

3. 加入130 μl 缓冲液AP2，颠倒混匀，冰浴5分钟。

4. 12,000rpm离心5分钟。

注：此步骤离心去除去垢剂，蛋白以及多糖等杂质。

5. 取上清（通常为400 μl）转移到过滤柱CF中，12,000rpm 离心1分钟。

6. 将滤出液转移到1.5 ml离心管中，加入1.5倍体积（例如400 μl的上清液加600 μl缓冲液AP3）缓冲液AP3（使用前请注意是否已经加入无水乙醇），立即颠倒混匀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

7．吸取步骤6中的混合液加入到吸附柱CG中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm离心1分钟，倒掉废液，吸附柱CG放回收集管中。

注：离心吸附柱的Z大容积是700μl，如果一次不能完全上柱，可以分次上柱离心，保证全部溶液全部加到离心柱中。

8．向吸附柱CG中加入500 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心1分钟，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。

9．重复步骤8。

10. 可选步骤：如果离心柱的吸附膜上有颜色，向吸附柱CG中加入500 μl无水乙醇，12,000 rpm离心1分钟，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。

11．将吸附柱CG放回废液收集管中，12,000 rpm离心2分钟。

注：此步骤非常重要，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。

12．将吸附柱CG转入一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100 μl经65℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000 rpm g离心2分钟。

注；1. 洗脱缓冲液体积不少于50 μl，体积过小影响回收效率。

2. 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。

13. DNA产物-20℃保存。

● DNA浓度及纯度检测：基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时， OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。





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·GXRNA保存液

编号：RFT033

规格：100ml

RNAGX保存液是一种的可直接使用的样品储存液，能使细胞内的RNA与RNA酶分离，可以快速可靠地保存动物组织、细胞内的RNA。组织获取后立即浸入RNAwait保存液中，在室温可以保存7天，4℃可以保存4周，-20℃、-80℃标本可以长期保存，RNA稳定存在不降解，取出后用各类方法抽提可以获得高质量的RNA。

保存条件：15–25，保质期2年。低温条件下有结晶析出时加热至37溶解后使用。

操作流程：1．根据要保存的各样本的体积，计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍（100mg组织约用1ml RNAwait）；离心收集2×107细胞RNAwait的用量是1ml。加入RNAwait的原则是：量宁多勿少。

建议在实际操作中不要称量组织，而直接根据目测结果加入RNAwait量，以加快操作和减少污染。例如5mm边长的立方体组织块，体积为125mm3=125μl，故应当加入1.25ml的RNAwait液。

2．将RNAwait按需要量分装入自备保存管中；

3．快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状，较小的组织直接取下，立即完全浸入RNAwait中。

组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入，组织中间部位的RNA不能受到保护。较大的组织可以切成厚度<0.5 cm的任意片状后保存，较小的组织（如大鼠的肾脏、脾脏，小鼠的大部分器官）则可以直接浸入RNAwait。

4．保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜（4℃过夜是必需的，这样可使RNAwait完全渗入到组织中），然后转移到-20℃冰箱（RNAwait在-20℃时仍为液态，如有结晶析出，也是正常情况）；或者在4℃冰箱过夜后，从RNAwait中取出组织块，将组织块转移到-80℃冰箱。

在RNAwait中保存的标本，反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。

注意事项：1. 组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。

2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。

3．保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复温到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。

4. RNAwait在动物组织（如大鼠肝脏，脾脏）和细胞（如DH5α）RNA的保护中效果不错；植物材料种类繁多，没能一一测试(烟草和拟南芥叶片中的RNA能被RNAwait有效保护)，建议预实验后再使用。





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·TMB显色液(沉淀型，组化或膜HRP显色用)

编号：RFT084

规格：100ml

● 产品简介：

TMB，即 3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine，是辣根过氧化物酶（HRP）的常用底物。在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下，TMB 会产生蓝色产物。TMB 显色液（沉淀型，组化或膜HRP显色用，TMB Color Development Solution for IHC or Blotting）采用新的单一溶液的 TMB 显色技术，用于 Western 或免疫组化等 HRP的显色检测，简化了操作步骤，并且使检测结果更加稳定可靠。本显色液具有高灵敏性，与 HRP反应后产生蓝紫色沉淀，沉淀吸附于印迹膜上，不会脱落，方便显色结果的保存和观察。

? 本试剂盒主要适用于免疫组化或原位杂交时HRP的显色检测，以及Western、Southern、Northern等HRP的膜显色检测；本显色液也可以用于原位检测细胞或组织内源性的过氧化物酶。由于产生的是沉淀型蓝色产物，不适用于ELISA检测。

? 用于免疫组化检测时，如果每个样品的显色液用量为0.1ml，则可以检测1000个样品；对于膜的显色检测，如果每次使用2.5 ml显色液，则可以检测40次。

● 保存条件：2-8℃避光保存；一年有效。

● 使用说明：? 如果发现TMB显色液出现混浊或颜色变成蓝色，应该停止使用。

一. 免疫组化检测：1. 参考免疫组化的实验步骤，在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。

2. 洗涤完毕后，去除洗涤液，滴加约100微升TMB显色液。

3. 室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可在湿盒中显色过夜)，直至显色至预期深浅。

4. 去除染色液，加入重蒸水孵育10分钟以终止反应。

5. 拍照记录或适当封片后拍照记录。如果有必要，可以使用中性红染色液进行复染后再进行拍照记录或适当封片后拍照记录。

二. 膜的HRP显色检测：1. 参考相应的实验步骤，在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次5分钟左右。

2. 洗涤完毕后，去除洗涤液，

3. 滴加约适量TMB显色液充分覆盖膜。

4. 室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可长达数小时)，直至显色至预期深浅。

5. 直接拍照记录。

● 常见问题：一. 背景显色太深。

1. 如果背景显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。另一方面，请选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。

2. 可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。

二. 没有显色或显色太弱。

1. 适当提高一抗或二抗的浓度。在离心管内用稀释的二抗与染色液反应，检测二抗是否可以被正常显色。

2. 可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。

3. 可以适当延长显色时间。

4. 如果上述改进不能获得预期效果，对于免疫组化或Western，可以考虑更换效果更好的一抗；对于Southern、Northern或原位杂交，则可以考虑更换探针。

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