RFT111 BL21(DE3)化学感受态细胞

BL21(DE3)化学感受态细胞厂家直销

规格：20×100ul

产地：国产|进口

编号：RFT111

品Pai：百奥莱博

储存条件：-70℃冻存六个月

产品简介：本公司生产的BL21(DE3)感受态细胞采用经特殊工艺处理得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达108cfu/μg，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。

BL21(DE3)菌株介绍：特点：(1)T7 RNA 聚合酶基因的表达受控于λ 噬菌体DE3 区的lacUV5 启动子，该区整合于BL21 的染色体上。

(2)适用于T7、T7 lac 启动子的表达系统，如pET，pEASY。

(3) 适用于非毒性蛋白的表达。

(4) 使用pUC19 质粒DNA 检测，转化效率可达107 cfu/μg DNA。

操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）

1取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。

以下实验以100 μl感受态细胞为例。

2 向感受态细胞悬液中加入目的DNA（50 μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30分钟。

3 将离心管置于42℃水浴中放置90秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。

4 向每个离心管中加入500 μl 无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素）， 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟（150转/分钟），目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5将离心管内容物混匀，吸取100 μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16小时。

注：涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm, 2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板）

注意事项：1. 感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免感受态细胞的转化效率。

2. 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。

3. 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到Z低。



我公司的BL21(DE3)化学感受态细胞厂家直销，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销售下列产品：



·土壤基因组DNA提取试剂盒

编号：RFT036

规格：50次

● 储存条件和效期：本试剂盒在室温（25℃左右）干燥条件下，可保存1年。缓冲液R2和R3可能有沉淀产生，若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。

● 产品简介：

土壤样品存在大量的YZ因子如腐殖酸、金属离子等，而纯化的DNA 中只要有这些微量物质的存在，都会影响到PCR等酶促反应。本公司的土壤试剂盒采用独特的腐殖酸去除液（缓冲液R2）能够有效去除腐殖酸；吸附柱CG能能有效去除金属等YZ因子，提纯得到的基因组DNA可直接用于PCR 反应，酶切或定量实验。

● 准备工作：1. 准备55℃，70℃水浴；无水乙醇；异丙醇；制冰机；1.5ml离心管；2ml离心管

2. 按照标签所示在漂洗缓冲液WB2中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。

3. 每次使用前请检查缓冲液R2，缓冲液R3是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

● 标准操作步骤：如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1. 称0.3-0.5 g土壤置于2ml离心管中，加入0.4 g Glass Beads，再加入780 μl 缓冲液R1与100 μl 缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5min。

注意：对含水量丰富的样品，可以预先离心除去部分水分后再称取样品。缓冲液R2是腐殖酸去除剂，100μl对大部分样品来说足以有效除去腐殖酸等YZ因子。对一些腐殖酸含量特别丰富的土壤， 缓冲液R2的量可以适当增加，但不能超过250μl，否则会严重影响DNA的得率。

2. 加入200 μl 缓冲液R3（R3如有沉淀37℃水浴完全溶解后再用），涡旋混匀。 70℃水浴处理10min。期间振荡几次。

注意：如果要纯化革兰氏阳性菌的DNA，请在70℃处理完后，再90℃水浴处理2min。

3. 12000 rpm(~13,000g)离心1分钟，取600μl上清到1.5ml离心管中，加入180 μl 缓冲液R4混匀。

注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量不超过80%。

4. 冰上放置5分钟。12000 rpm(~13,000g)离心1分钟。 转移上清到新的1.5ml离心管中。

注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量不超过80%。

5. 加入0.7倍上清体积的异丙醇颠倒混匀。12000 rpm(~13,000g)离心2分钟。小心地倒掉上清。

注：如果样品中DNA含量很低，加入异丙醇混匀后-20℃放置1小时。

6. 加入350μl 缓冲液R5，待沉淀完全溶解后加入300μl无水乙醇，混匀。

注：为加速溶解沉淀，可置样品于55℃水浴中。

7. 将上步混合液转移到吸附柱CG中（吸附柱放入收集管中），12000rpm离心30秒，倒掉滤过液。

8. 向吸附柱CG中加入500μl 漂洗缓冲液WB1，12,000 rpm (~13,000×g ) 离心30 秒，倒掉废液。

9. 向吸附柱CG中加入600μl 漂洗缓冲液WB2(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000 rpm (~13,000g) 离心30秒，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。

10. 向吸附柱CG中加入600μl漂洗缓冲液WB2，12,000 rpm (~13,000g) 离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CG放入收集管中。

11. 12,000 rpm(~13,000g)离心2分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

注：此步骤非常重要，其目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。

12. 将吸附柱CG转入一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50–100 μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000 rpm(~13,000g)离心2分钟。

注； = 1 \* GB3 ① 洗脱缓冲液体积不少于50 μl，体积过小影响回收效率。

= 2 \* GB3 ② 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。

13. DNA产物-20℃保存。

大量操作步骤（针对含微量核酸的样品）

1. 称1-5g土壤置于10ml离心管中，加入1g Glass Beads，再加入3ml 缓冲液R1与200μl 缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5分钟。

2. 加入600μl 缓冲液R3，涡旋混匀。70℃水浴处理10分钟。期间振荡几次。

3.3000g离心3分钟，转移上清到新的离心管中，加入550μl 缓冲液R4混匀。

4. 冰上放置5分钟。8000g离心10分钟。转移上清到新的离心管中。

5. 以下按标准操作步骤的第五步继续操作。

● DNA浓度及纯度检测：基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时， OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。

● 常见问题分析：常见问题 可能原因 建议

没有洗脱出DNA 加入缓冲液R5后没有加入无水乙醇 样品过柱前，必须用无水乙醇调整核酸结合条件，否则核酸不能挂柱。

漂洗缓冲液WB2中没有加入乙醇 漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。无水乙醇加入量不正确会导致核酸提取量大大降低。

低浓度的DNA量 缓冲液R2使用过量 按照步骤1加入适量缓冲液R2

洗脱体积太小 洗脱体积不能低于50μl，如洗脱体积太小，回收率将大大降低。

洗涤不恰当 漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。无水乙醇加入量不正确会导致核酸提取量大大降低。

低A260/A280比率 蛋白污染 不要忽略步骤8中用漂洗缓冲液WB1冲洗吸附柱

洗脱液pH值不合适 确保使用的洗脱液pH在8.0以上，如低于8.0将导致DNA洗脱量过低。

下游应用不好 提取的DNA含盐量高 漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。

提取的DNA含有乙醇 步骤11空甩柱子2分钟非常关键，彻底去除漂洗液中的乙醇。

YZPCR反应 增加缓冲液R2用量，彻底去除腐殖酸等PCRYZ因子；步骤4中确保不要吸取到沉淀。





BL21(DE3)化学感受态细胞厂家直销关键词：BL2,DE3,RFT111,百奥莱博,BL21(DE3)化学感受态细胞





·Western封闭液II（奶粉）

编号：RFT087

规格：100ml

● 产品简介：

Western Blot 实验中，为防止印迹膜与检测系统中的蛋白成分（如抗体 IgG 等）发生非特异性吸附，导致实验结果不清晰，通常在进行一抗孵育前需预先对印迹膜上的非特异结合位点进行封闭。

本产品以奶粉为基础，采用独特配方，可快速GX地封闭膜上多余的结合部位，减少非特异结合情况的产生，降低背景，适用于各种转印膜的封闭，操作方便快捷。

另外，本产品特别添加了蛋白稳定剂，可保证每次实验封闭效果稳定可靠。

● 贮存： 2-8℃贮存，有效期半年。

● 注意事项：1 由于奶粉中含有微量牛IgG，其结构与羊(goat and sheep)IgG极其类似。因此来源于羊的一抗或二抗能与牛IgG交叉反应，产生高背景。因此该封闭液不推荐用于羊来源的一抗或抗羊的二抗。

2 奶粉中含有生物素，该封闭液不能用于Streptavidin/Biotin系统。

3 该封闭剂是适合ECL/HRP系统的封闭剂。

● 使用说明：特别提醒：该产品效期较短，开盖后如有异味或有絮状沉淀，表明已经失效，不能使用。

1. 本产品无需稀释，开盖即用。

2. 目的蛋白转移完毕后，将印迹膜放入容器中，加入适量Western封闭液II(以完全覆盖印迹膜为宜) 。

3. 室温孵育30分钟至2小时，必要时可4℃孵育过夜。

4. 封闭结束后弃去封闭液，进行Western Blot后续操作。



·1kb plus DNA ladder（300-10000bp）

编号：RFT004

规格：100次

● 产品简介：

本产品是由12条带状双链DNA条带组成，适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。

本产品为即用型产品，已含有1×loading buffer，可根据实验需要，直接取2-5μl电泳，使用方便，电泳图像清晰。本产品中12条带为300，500，800，1000，1500，2000，3000，4000，5000，6000，8000，10000bp。其中2000bp条带含量为100ng/5μl，其余条带浓度含量为50ng/5μl。

● 储存条件：4℃ 6个月，-20℃ 1年。

● 使用方法：1.取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中进行电泳。

注：根据电泳梳子的厚度和宽度确定上样量。每1mm×1mm（厚度×宽度）加样孔上样1μl；窄齿梳子（一般为1mm×2mm）上样2μl；宽齿梳子（一般为1mm×5mm）上样5μl。如果使用厚齿梳子或宽于5mm的梳子，可以适当调整上样量。

2.建议电泳条件：凝胶浓度为1.0％，凝胶长度8-10cm，电泳电压4-10v/cm，电泳时间35-40分钟。

3.通过EB染色后紫外灯下观察条带。

注：如果使用Goldview等染料就行染色，由于灵敏度比EB低，请酌情增加Marker的上样量。

● 注意事项：1.琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响，电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。

2.请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳，以保证Marker良好的分离效果





BL21(DE3)化学感受态细胞厂家直销关键词：BL2,DE3,RFT111,百奥莱博,BL21(DE3)化学感受态细胞





·快速银染试剂盒

编号：RFT055

规格：25次

● 储存条件：常温保存，开封后一年有效。

● 产品简介

快速银染试剂盒(Fast Silver Stain Kit)是一种快速简单、可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白银染的试剂盒。本试剂盒也可以用于2D凝胶的银染，并且染色后兼容后续的质谱检测。本试剂盒只需约90分钟内可以完成凝胶的银染。对于BSA蛋白，检测灵敏度可以达到0.3ng蛋白。

本试剂盒可足够用于25块常规的8×10cm凝胶的银染。

说明书后附有实验记录表格，方便记录实验步骤。

● 产品组成：产品名称 规格 贮存

银染增敏液(100×) 26 ml 常温

银溶液(100×) 26 ml 常温，避光

银染基本显色液(10×) 250 ml 常温

银染显色加速液(2000×) 1.5 ml 常温，避光

银染终止液(20×) 125 ml 常温

● 注意事项：1. 由于银染非常灵敏，操作时请注意尽量使用高纯度的水，并确保所使用的器皿非常清洁，使用洁净的玻璃器皿。操作时必须戴手套，避免皮肤和凝胶直接接触。

2. 需自备乙醇、冰醋酸及MilliQ级纯水或双蒸水。

3. 下述使用说明中各种溶液的使用量适用于大小为8×10cm厚度为0.75-1mm的凝胶。对于更大的凝胶，各种溶液的使用量需按凝胶面积的比例放大，对于更厚的凝胶，作用时间需按照厚度的比例适当延长。

4. 本说明书所指的常温温为20-25℃，操作温度较低时由于溶液的扩散能力下降，各步骤需适当延长时间。

5. 银染基本显色液(10×)在低温环境下可能会出现沉淀，可在30-37℃水浴中溶解，并充分混匀后使用。

● 使用方法：一. 固定步骤：1. 电泳结束后，取凝胶放入约100ml固定液中，在摇床上室温摇动20分钟，摇动速度为60-70rpm。固定40分钟以上甚至过夜可以进一步降低背景。

固定液的配制：固定液配制量 无水乙醇 冰醋酸 超纯水

100 ml 50 ml 10 ml 40 ml

2. 30%乙醇洗涤：弃固定液，加入100ml 30%乙醇，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。

30%乙醇的配制：70ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入30ml乙醇，混匀后即成100ml 30%乙醇。

3. 水漂洗：弃30%乙醇，加入200ml MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。

二. 增敏步骤：1. 弃水，加入100ml银染增敏液(1×)，在摇床上室温摇动2分钟，摇动速度为60-70rpm。

银染增敏液(1×)的配制：99 ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入1ml银染增敏液(100×)，混匀后即为银染增敏液(1X)。银染增敏液(1×)配制后需在2小时内使用。

2. 水漂洗(共2次)：弃原有溶液，加入200ml MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动1分钟，摇动速度为60-70rpm。 重复此步骤一次。

三. 银染步骤：1. 弃水，加入100ml银溶液(1×)，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。

银溶液(1X)的配制：99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入1ml银溶液(100X)，混匀后即为银溶液(1X)。银溶液(1X)配制后需在2小时内使用。

2. 水洗涤：弃原有溶液，加入100ml MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动1-1.5分钟，摇动速度为60-70rpm。

注意：水洗涤的时间不能超过1.5分钟。

四. 显色步骤：弃水，加入100ml银染显色液，在摇床上室温摇动3-7分钟，直至出现比较理想的预期蛋白条带，摇动速度为60-70rpm。

银染显色液的配制：银染显色液配制量 银染基本显色液(10×) 超纯水 银染显色加速液(2000X)

100 ml 10 ml 90 ml 0.05 ml

注：银染显色加速液(2000X)有刺激性气味，建议在通风橱内操作；银染显色液配制后需在20分钟内使用。

五. 终止步骤：1. 弃银染显色液，加入100ml银染终止液(1×)，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。终止时有气体产生属正常现象，产生的气体为二氧化碳。

银染终止液(1×)的配制：95ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入5ml银染终止液(20×),混匀后即为银染终止液(1X)。银染终止液(1X)配制后宜当天使用。

2. 水洗涤：弃银染终止液，加入100ml MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动5分钟，摇动速度为60-70rpm。

六. 保存：可在MilliQ级纯水或双蒸水中保存。或采用适当的方式制备成干胶。

● 常见问题：1. 背景太深：a. 显色时间过长。通常显色反应会在10分钟内结束，显色反应时间过长会导致背景很深。

b. 洗涤不充分。洗涤时间过短，或洗涤液加入的量不足，或者容器过于狭小导致摇动时溶液不易充分混合，或摇动速度过慢，导致混匀不充分。请按照说明书的建议确保各种溶液的用量和作用时间，摇床的推荐速度为60-70rpm。

c. 凝胶中原有的缓冲液等未在固定步骤中去除干净。一方面需确保固定的时间和固定液的用量，另一方面对于不是常用的Bis-Tris缓冲的凝胶需要更长的固定时间以充分去除凝胶中的原有缓冲成分，以降低背景。

d. 水的纯度太低。需使用大于16 MΩ·cm的高纯度水。

2. 蛋白条带非常浅：a. 蛋白的半胱氨酸(Cysteine)残基的含量特别低或几乎没有。半胱氨酸残基的存在对于银染非常重要，半胱氨酸残基的含量过低会导致检测灵敏度下降。

b. 银染后水洗涤时间过长。在银溶液染色时需严格控制水洗涤的时间，水洗涤的时间不能超过1.5分钟，否则会导致过多的银离子被洗去，导致检测灵敏度下降。

c. 上样量不足。本试剂盒检测BSA的灵敏度可以达到0.3ng，对于不同的蛋白检测灵敏度可能不同。对于一些蛋白可能需要大于1ng的蛋白量才能被检测到。

d. 固定步骤后的洗涤不够充分。导致少量乙酸残留，影响后续检测。确保30%乙醇洗涤和水洗涤的用量和时间，可以适当延长洗涤时间。

3. 凝胶上出现小点或或其它非蛋白的痕迹：a. 凝胶没有充分被溶液浸没。请注意选择大小合适的容器，并加入足量的各种溶液，同时需保持适当的混匀速度确保凝胶可以被溶液浸没。

b. 用于银染的容器没有充分洗涤干净。容器需先用洗涤剂充分洗涤，随后用自来水充分冲洗，后用高纯度水再洗涤数次。该容器能专用于银染，并注意避免各种可能的蛋白污染。为确保充分洗涤干净，对于耐硝酸的容器，例如玻璃容器，可以在上述洗涤剂及自来水洗涤后用50%硝酸洗涤，随后用高纯度水充分洗涤。

c. 指纹或其它压痕。请注意戴手套操作，切勿直接接触皮肤。操作时请注意尽量勿挤压、折叠或摩擦凝胶。

d. 有金属物质接触凝胶。金属物质例如金属镊子等接触凝胶会出现非特异性痕迹。

4. 在60-70 kD处出现一片模糊的蛋白染色背景：皮肤上脱落的角蛋白(keratin)污染了蛋白样品。一方面需注意戴手套操作，另一方面需注意盛放蛋白样品的容器盖子尽量不要敞开，甚至在取放蛋白样品时在超净台内进行以避免可能的角蛋白污染。

5. 在凝胶的顶端处出现黄色背景：a. 样品中DTT浓度很高。采用其它适当的还原试剂，或者在许可范围内适当减少DTT

的用量。

b. 采用Tris-Glycine-SDS电泳体系。Tris-Glycine-SDS电泳体系中的Glycine会导致

背景凝胶的顶端出现轻微的黄色背景。

6. 银在染色器皿中出现沉淀： 染色器皿中可能含有残余的洗涤剂或上次银染时的残余试剂。需确保把染色器皿洗涤干净。

我公司正在打折促销细胞及免疫学全系列产品，恭候您的咨询选购BL21(DE3)化学感受态细胞厂家直销。