特异性蛋白1(Sp1)多克隆抗体

多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）是指用含有多个抗原决定簇的抗原免疫动物后刺激机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体，得到的免疫血清含有多种抗体。多克隆抗体可应用于WB、IHC、Elisa、IP等实验中，是生物医学研究领域不可或缺的研究伙伴。下面我们会来介绍一下多克隆抗体的制备过程。
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白，通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白，纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原，常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
选择动物时应考虑抗原和免疫动物的种属差异，种系相近会影响免疫效果，一般要求动物适龄，健康，体重符合要求。常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等，大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。动物接受免疫的乳液量小鼠为1.0~2.0 ml， 家兔为2~4 ml。添加佐剂可帮助抗原在注射部位缓慢释放，增加免疫效果，常用佐剂为弗氏不完全佐剂。
初次免疫后要经过2~3次以上的加强免疫以形成较高水平的IgG抗体。初次免疫和再次免疫之间，小动物一般间隔10~14天，大动物间隔60天左右。在每次加强免疫后，进行抗血清效价测定，当效价达到理想状态时，便采集抗血清。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血，家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血，家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。也可采用尾巴或眼眶取血，静置待血液凝固成血块收缩析出血清，3000rpm离心15 min，取上清。这个过程要注意动物的养护，耗时长，但得率低，得到的血清还需进一步的纯化。
4. 免疫血清的纯化与鉴定
得到的抗血清需要进一步的纯化，利用偶联了抗原的亲和柱进行层析，具有GX，特异性强，纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存
建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价，而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经CJ并添加防腐剂。
由于多克隆抗体具有成本低、制备周期短且制备步骤相对简单、可识别多个表位等优点，在科研领域应用非常广泛。以上就是关于多克隆抗体制备的一个基本流程。供大家参考。