血液基因组DNA非离心柱型（0.1~20ml）

无柱式血液基因组DNA提取试剂盒（ZP313）

■ 产品简介

本试剂盒采用独特的缓冲液系统，提取0.1ml -20ml加入各种抗凝剂的新鲜血液和冻存血液样品基因组DNA。本缓冲液系统可ZD限度去除蛋白、色素、脂类及其他YZ性杂质污染。提取的基因组DNA片段大，产量高，纯度好，稳定可靠。

本试剂盒避免使用苯酚、氯仿等有机溶剂，回收的DNA可适用于各种常规操作，如酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

 

■ 产品特点

量大质优：提取0.1ml-20ml各种血液，可获得多达2-400μg高纯度DNA。

安全可靠：无苯酚、氯仿等有机溶剂的污染。

价廉物美：与同类产品相较，性价比高，纯化得到的DNA样品可长期保存。

 

■ 提取得率

材料	保存时间	提取量	DNA产量	OD260 / OD280
人类全血	4℃一周	1 ml	20-40 μg	1.7 - 1.9
人类全血	4℃一周	5 ml	120-240 μg	1.7 - 1.9
人类全血	4℃一周	10 ml	200-400 μg	1.7 - 1.9

 

■ 储存条件

所有试剂置于室温（15-25℃）干燥条件下可保存12个月，保存更长时间可置于2-8℃。

产品特点： 
量大质优：提取 0.1ml-20ml 各种血液，可获得多达 2-400μg 高纯度 DNA。 
安全可靠：无苯酚、氯仿等有机溶剂的污染。 
价廉物美：与同类产品相较，性价比高，纯化得到的 DNA 样品可长期保存。 
注意事项： 
1． 血液样品反复冻融，会导致提取的 DNA 片段较小且提取量下降。所得基因
组 DNA 也应尽可能避免反复冻融，以免断裂。 
2． 血液样品的储存： 
a) 短期保存：已加入抗凝剂的血液样品可在 2-8℃储存最多 10 天，对于某
些实验例如 Southern 杂交等，需要得到完整全长的基因组 DNA，请将
血液样品在 2-8℃储存不超过 3 天，此时基因组 DNA 的降解程度较轻。 
b) 长期保存：已加入抗凝剂的血液请置于-70℃保存（
如果提取的是高分
子量的 DNA，推荐使用 EDTA 作为抗凝剂
） 
3． 所有离心操作均可在室温下完成。 
4． 红细胞裂解液
为 10×母液，实验时请用蒸馏水稀释至 1×使用。 
 
 一、 小体积全血操作流程（<600
μl 血样；
以 300
μl 血液处理量为例
） 
1．向 300μl 抗凝剂的血液中加入 750μl 1×红细胞裂解液 L
 （
10×红胞裂解液
 
L 需要稀释为 1×使用
），颠倒混匀 5 次。 
注意：为方便与离心机配套使用，可加入与血液等体积的细胞裂解液 L, 重复
裂解两次。 
2．10,000×g 离心 20 秒。倒弃上清，将离心管倒置在干净的吸水纸上停留 2 分 
钟，确保沉淀在管中（
此步骤应小心操作，为避免沉淀被倒出，推荐使用尖
底离心管
）。 
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清，将离心管倒
置在吸水纸上是为了减少管壁上清的回流。 
3．按照表 1 配制缓冲液 E 与蛋白酶 K 的混合液。 
注意：此混合液现用现配，并在配好后 1 小时之内用完。 
4．加入 150μl 缓冲液 E 与蛋白酶 K 的混合液， 立即涡旋混匀至溶液无团块。 
注意：当处理多个样品时，加入缓冲液 E 和蛋白酶 K 的混合液后要立刻涡旋
混匀，不要等所有的样品加完后再涡旋振荡。通常涡旋混匀 5 秒就足以混匀
沉淀，但是有可能痕量的胶状沉淀难以混匀，此时可再次补加缓冲液 E 和蛋
白酶 K 的混合液（具体补加量见表 1），再次涡旋混匀。 
5．65℃水浴 10min，其间颠倒混匀数次。 
注意：随着蛋白的消解，溶液的颜色从红色变为黄绿色。 
6．加入 150μl 异丙醇，颠倒充分混匀至出现丝状或簇状基因组 DNA。 
注意：与异丙醇完全混合对于沉淀 DNA 非常重要，应该仔细观察。对于白细
胞数目很少的样品，DNA 沉淀可能看不到，此时应该至少颠倒离心管 20 次
确保沉淀完全。 
7．10,000×g 离心 3 分钟，倒弃上清。将离心管倒置在干净的吸水纸上，确保沉
淀在管中。 
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清。如果样品的
白细胞数量足够多，可以看到白色的 DNA 沉淀。 
8．加入 150μl 70%乙醇，涡旋振荡 5 秒钟，10,000×g 离心 3 分钟，倒弃上清。
重复步步骤一次。 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
9．将离心管倒置在干净的吸水纸上停留至少 5 分钟，确保沉淀在管中。 
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清，将离心管倒置 
 在吸水纸上是为了减少管壁中上清的回流
。 
10．空气干燥 DNA 沉淀直至所有的液体挥发干净（至少 5 分钟）。 
注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。但是要避免 
过分干燥 DNA 沉淀，因为过于干燥的 DNA 很难溶解。 
11．加入 200μl 洗脱缓冲液 TE，低速涡旋 5 秒，65℃加热 10 分钟~1 小时溶解 DNA，
其间轻弹数次助溶。 
注意：如果 DNA 没有完全溶解，可室温过夜。如果使用少量的缓冲液 TB 
解 DNA，孵育时间可能需要延长。 
 
二、
中量全血操作流程（1－10ml
血样；
以 5ml
血液处理量为例
） 
1．向 5ml 含抗凝剂的血液中加入 5ml1×红细胞裂解液 L
 （
10×红胞裂解液 L 需要
稀释为 1×使用
），颠倒混匀 5 次，2000×g 离心 5 分钟，倒弃上清； 
2．再向其中加入 7.5ml 细胞裂解液 L，颠倒混匀 5 次，10,000×g 离心 5 分钟，倒
弃上清，将离心管倒置在干净的吸水纸上停留 2 分钟，确保沉淀在管中（
此步骤
应小心操作，为避免沉淀被倒出，推荐使用尖底离心管）。 
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清，将离心管倒置
在吸水纸上是为了减少管壁上清的回流。 
3．按照表 1 配制缓冲液 E 与蛋白酶 K 的混合液。 
注意：此混合液现用现配，并在配好后 1 小时之内用完。 
4．加入 2.5ml 缓冲液 E 与蛋白酶 K 的混合液， 立即涡旋混匀至溶液无团块。 
注意：当处理多个样品时，加入缓冲液 E 和蛋白酶 K 的混合液后要立刻涡旋混
匀，不要等所有的样品加完后再涡旋振荡。通常涡旋混匀 5 秒就足以混匀沉淀，
但是有可能痕量的胶状沉淀难以混匀，此时可再次补加缓冲液 E 和蛋白酶 K 的
混合液（具体补加量见表 1），再次涡旋混匀。 
5．65℃水浴 10－30min，其间颠倒混匀数次。 
注意：溶液的颜色从红色变为黄绿色，表示蛋白成分在发生变性。 

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