FISH检测、CISH检测、原位杂交、原位杂交检测、荧光原位杂交、RNA原位杂交、DNA原位杂交、RNA水平、DNA水平、实验外包、原位杂交实验外包

客户提供探针或者探针碱基序列，我公司可以代为合成。标本的固定、包埋要严格按照原位杂交的要求进行，以防止RNA降解。实验周期1-2周。实验结束我公司提供详细实验流程、载玻片和探针。标本的固定、包埋详情请来电咨询。
FISH实验流程:

1. 常规脱蜡至水洗;

2.       制作湿盒：用5×SSC（35ml）+ ***（35ml）置于湿盒内。
3.       30%H₂O₂1份+9份纯 **混合液室温处理10min。DEPC水洗3次，每次1min;
4.       切片置于湿盒内，用0.2mol/L盐酸滴于组织上，常温15min，用DEPC水洗2次，每次1min（盐酸可中和带电荷的碱性蛋白，降低背景）
5.       蛋白酶K覆盖组织，分子杂交仪中37℃20min。蛋白酶K可以消化和暴露被遮蔽的靶核酸，增加探针的结合效率。
6.       用0.2%或0.1mol/L甘氨酸洗液洗1min（现用现配），终止蛋白酶K。
7.       PBS洗两次，每次一分钟。
8.       用4%PFA ****固定组织10min。
9.       PBS洗三次，每次1min。
10.   用acetic anhydride ***ph=8.0（    **化作用，降低背景）室温洗5min，2次。
11.   用PBS洗5次，每次1min。
12.   用5×SSCph=7.5洗两次，每次1min。
13.   切片放置湿盒内，用预杂交液 覆盖组织，65℃预杂交 1h。
14.   500ng/ml  digoxigenin-labeled pube 探针覆盖切片，在杂交仪内62-70℃黑暗反应24~72h，反应温度与反应时间视不同的组织与探针而定，建议一般65℃48h。
15.   用2×SSC ph=7.5，室温洗1次，1min。
16.   用甲酰胺 加4×SSC ph=4.5 1:1混合液在60℃或65℃洗三次，每次20min。
17.   用PBS洗5次，每次1min，室温。
18.   将切片置于湿盒内，用封闭液覆盖切片，室温反应至少30min。
19.   滴加生物素化鼠抗Dig抗体，37℃60min反应，

1. 用Tris/NaCl buffer洗5-7次，每次1min，室温
2. 用NTM buffer 洗2-3次，每次1min，室温
3. 在湿盒内，用NBT/BCIP200ul+4ul染色液覆盖组织，室温反应24h，避光
4. 用PBS洗2次，每次1min，室温
5. 封片:

   将组织切片依次放入蒸馏水（20s），70%酒精（20s），90%酒精（20s），100%酒精（20s），二 **（10min），二 **（10min）。同时，准备盖玻片（用擦镜纸擦净）

1. 取出切片，擦干后滴一滴树脂胶，盖上盖玻片。

我们提供：
  1. 提供完成实验的玻片
  2. 每张切片提供1张合适视野的照片
  3. 提供具体的实验方法、步骤、所用试剂、仪器、及相关分析数据等，实验结果将以电子或书面形式提交给您
结果示意图：

 服务周期：
 一周以内
 温馨提醒：
      提供实验必要的信息，例如组织来源、实验目的和拍照要求