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Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒

产品信息
  • Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒产品描述
    细胞衰老（Cell senescence）是细胞控制其生长潜能的保障机制，一般含义是复制衰老（Replicativesenescence，RS），指正常细胞经过有限次数的分裂后，停止分裂，此时细胞虽然是存活的，但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化的现象。体外衰老细胞研究常用的生物学特征包括：1）不可逆的生长停滞；2）与衰老相关的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA β-gal）的活化。作为溶酶体内的水解酶，通常在pH 4.0的条件下表现活性，但是衰老细胞内其在pH 6.0的条件下表现活性，且随着传代次数的增加，细胞群体中表现衰老相关的β-半乳糖苷酶的细胞数目逐渐增加。
    本试剂盒正是基于活性变化的生物学特征而设计的，专门用于对衰老细胞或组织进行染色检测的一种技术。本试剂盒以X-Gal为底物，通过细胞内SA β-gal在酸性条件下稳定表达，催化底物生成深蓝色产物，从而在光学显微镜下观察颜色变化以分析细胞的衰老状况。
    本试剂盒适用于人和各种动物体外培养细胞的衰老检测。产品性能稳定，参数经优化，着色敏感，特异性高。仅对衰老细胞进行染色，不会染色衰老前的细胞（presenescent cells）、静止期细胞（quiescent cells）、永生细胞（immortal cells）或肿瘤细胞。
    产品组分
    组分编号 组分名称 规格 保存
    40754-A A（Washing Buffer A） 100 ml 4ºC或-20℃保存
    40754-B B（Fixative Solution B） 100 ml -20℃保存
    40754-C X-Gal溶液C（X-Gal Solution C） 5 ml -20℃避光保存
    40754-D 染色液D（Staining Solution D） 1 ml -20℃保存
    40754-E 染色液E（Staining Solution E） 1 ml -20℃保存
    40754-F 染色液F（Staining Solution F） 100 ml -20℃保存
    Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒运输与保存方法
    冰袋运输。-20℃保存，一年有效，其中X-Gal溶液需避光保存。
    注意事项
    1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
    2. 本试剂盒固定液B存在一定的腐蚀性和毒性，操作时请注意小心防护。
    3. 染色液E刚刚溶解后会观察到有沉淀，属正常现象，充分混匀或者漩涡震荡可促使沉淀全部溶解，之后用于染色实验。
    4. X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的细胞样品可以在 4ºC冰箱保存，但也需避免光照。
    5. 细胞β-半乳糖苷酶活性强，孵育3 h即显示阳性；细胞β-半乳糖苷酶活性弱，则需要孵育24 h。细胞染色最长孵育时间为 24 h。细胞呈现蓝色的部位即为衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶活性部位。
    6. 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH值，不能用于细胞培养的CO2培养箱中进行染色反应。因为CO2培养箱中较高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
    7. 本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35 mm 培养皿和各种孔数的细胞培养板，只需按照一定的比例调整工作液用量即可（参考表2）。
    使用方法
    1. 实验前的准备工作：
    2. 染色工作液配制
    实验开始前，将试剂盒内各组分从冰箱内取出，置于室温回温15~20min。其中X-Gal溶液C置入冰槽里等待溶化。根据以下染色工作液配方表（表1），实验体系类型，检测样本数，统一配制单次实验需要的染色工作液总量。混匀后，置入37ºC恒温水槽里预热，即为染色工作液。
    表1 染色工作液配方表
    染色液D 10μl
    染色液E 10μl
    染色液F 930μl
    X-Gal溶液C 50μl
     
    Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒注意：配制染色工作液时需使用聚丙烯（polypropylene）容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯（polystyrene）容器，对于二者的判定：聚丙烯容器可高压灭菌，而聚苯乙烯容器则不可高压灭菌，一旦高温高压处理就会严重变形。但是染色过程可以在聚苯乙烯容器内进行，如细胞培养常用的6孔板。
    2）不同体系染色工作液用量
    本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35 mm 培养皿，和各种孔数的细胞培养板，可参考下表2调整染色工作液用量：
    细胞培养类型 建议处理液 用量
    载玻片（组织切片） 1 ml
    载玻片培养皿 1 ml
    35 mm 培养皿 1 ml
    96 孔培养板 0.1 ml
    48 孔培养板  0.2 ml
    24 孔培养板 0.25 ml
    12 孔培养板 0.5 ml
    6 孔培养板 1.0 ml
    1. m2培养瓶
    		 3.0 ml
     
    注意：以上用量仅作为参考，对于染色工作液的实际用量以充分覆盖住细胞和组织为准。根据以上用量，本试剂盒对于6孔板，足够做100个样本的检测；对于24孔板，足够做400个样本的检测；对于96孔板，足够做1000个样本的检测。对于组织切片足够做100个样本检测。但是组织切片的厚度，大小对染色液用量的要求明显不同，必须做合理用量调整。
    1. 6孔细胞培养板染色（贴壁细胞）：
    2. 吸除细胞培养液，用1ml清洗液A洗涤1次，加入1ml 固定液B，覆盖整个生长表面。室温固定15min。
    注意：对于其他类型的培养板，固定液用量参照此比例进行操作。
    1. 吸除固定液B，用1ml清洗液A洗涤细胞3次，每次3min。
    2. 吸除清洗液A，每孔加入1ml预热的染色工作液，覆盖整个生长表面。
    3. 37℃孵育3 h～16 h，或直到细胞呈现蓝色，可以用封口膜或保鲜膜封住6孔板防止液体蒸发。
    注意：37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
    5） 普通光学显微镜下观察和计数：表达SA β-gal的细胞为阳性细胞，呈现蓝色。如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加入2ml 清洗液A或PBS缓冲液，4℃可以保存数天，或者加入封片剂封片后，4℃可保存较长时间。
    1. 悬浮细胞染色：
    2. 离心收集细胞至1.5ml离心管内，用1ml清洗液A洗涤1次，加入1ml 固定液B，覆盖整个生长表面。室温固定15min。固定时可以在摇床上缓慢摇动，以避免细胞结成团块。 
    1. 离心，吸除细胞固定液，用1ml清洗液A洗涤细胞3次，每次3min。
    2. 离心，吸除清洗液A，每管加入0.5-1ml预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。
    3. 37℃孵育3 h～16 h，或直到细胞呈现蓝色（注：避免液体蒸发）。
    注意：37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
    1. 取部分染色好的细胞，滴加到载玻片上或6孔板内，普通光学显微镜下观察和计数。如不能及时观察计数，可以离心，去除染色工作液，加入1ml清洗液A或PBS缓冲液，4℃可以保存数天。也可取细胞用于涂片，加上封片剂封片后，4℃可保存较长时间。
    2. 组织切片染色：
    3. 对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡或水化处理。对于冰冻切片直接按照以下步骤进行；
    4. 加入适当体积的固定液B，以充分盖住组织为宜，室温固定不少于15min。
    5. 用清洗液A浸泡洗涤组织3次，每次不少于5min；
    6. 吸除清洗液A，加入适当量的预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。
    7. 7℃孵育过夜，可以用封口膜或保鲜膜封住防止蒸发，把整个切片浸泡在染色工作液中。
    注意：37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
    Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒
    xy-axbz-023    小鼠瘤细胞    FO    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-024    小鼠淋巴瘤细胞    Yac-1    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-025    小鼠淋巴瘤细胞    EL4    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-026    小鼠淋巴瘤细胞    EL4.IL-2    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-027    小鼠黑色素瘤细胞    B16F1    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-028    鼠黑色素瘤细胞系    B16-Fo    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-029    小鼠黑色素瘤高转移细胞    B16F10    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-030    小鼠黑色素瘤细胞    B16BL6    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-031    小鼠黑色素瘤细胞    B16    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-032    小鼠SRSV转化的3T3细胞    SRSV/3T3    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-033    小鼠胚胎成纤维细胞    BALB/3T3 clone A31    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-034    小鼠肝癌细胞    H22    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-035    小鼠肝癌细胞    Hepa 1-6    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-036    大鼠肝癌细胞    CBRH-7919    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-037    大鼠肝癌细胞    RH-35    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-038    小鼠畸胎瘤细胞    F9    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-039    小鼠畸胎瘤细胞    P19    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-040    大鼠神经胶质瘤细胞    C6    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-041    小鼠脑神经瘤细胞    Neuro-2a    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-042    大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞    PC12    规格25毫升/株.        
    编号    中文    英文名称    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-043    大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(未分化)    PC-12    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-044    大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(低分化)    PC-12    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-045    大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)    PC-12    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-046    小鼠睾丸间质细胞瘤细胞    MLTC-1    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-047    小鼠前列腺癌细胞    RM-1    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-048    小鼠肛门肉瘤细胞    S-180    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-049    鼠肝星形细胞    HSC-T6    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-050    大鼠正常肝细胞    BRL-3A    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-051    大鼠肝细胞    BRL大鼠Buffalo    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-052    小鼠成纤维细胞    3T3    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-053    小鼠Mo-MuLv感染的3T3细胞    Mo-MuLV/3T3    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-054    小鼠成纤维细胞    3T3NIH    规格25毫升/株.        
    xy-axbz-055    逆转录病毒包装的NIH3T3细胞    PA317    规格25毫升/株.        
     
    • 信息声明：本产品供应信息由仪器网为您整合，供应商为（上海信裕生物科技有限公司），内容包括 （Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒）的品牌、型号、技术参数、详细介绍等；如果您想了解更多关于 （Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒）的信息，请直接联系供应商，给供应商留言！
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