PCR定点突变和基因定点突变

PCR定点突变和基因定点突变                                             
PCR定点突变是指利用重叠延伸PCR方法在目的基因中引入单个或多个碱基的突变，包括碱基的添加，删除，替换等。从而对改变的目的蛋白进行形状和表型的研究。
长片段基因定点突变是指利用一对完全互补的突变引物，以克隆在载体上的基因为模板，在高保真Pfu酶作用下完成对载体的突变，再利用DpnI酶特异性酶解未发生突变的原始单链。将消化后的单链载体转化到感受态细胞中，利用载体菌的自身互补系统将另一条链进行互补，ZZ形成完整的含有突变位点的载体。
一、服务内容
1. 基因编码区，非编码区的单位点和多位点突变；
2. 大片段基因的单位点和多位点突变；
3. 含高GC含量和重复序列基因或大片段的单位点和多位点突变。
二、收费标准
 

服务项目	内容说明	收费标准￥	实验周期
PCR定量突变	<1500 bp	3000/样品	2-3 周
长片段基因定点突变	1500 bp~6 kb	5000/样品
长片段基因定点突变	6 kp~10 kb	7000/样品	3-4周
长片段基因定点突变	10 kp~15 kb	请询价	3-4周
高GC含量基因和片段点突变	<3 kb (>3 kb)	6000/样品(请询价)	3-4周
重复序列片段点突变	<3 kb (>3 kb)	6000/样品(请询价)	3-4周

三、样品要求
1. 请提供待突变的质粒(> 1μg)或相应菌液；
2. 待突变的野生型基因或片段测序图谱一份；
3. 待突变位点的具体单位点和多位点要求；
4. 若无野生型的质粒或模板，也可提供基因组DNA(> 1μg)或RNA，由我们完成野生型基因或片段的构建，具体收费标准和实验周期请参考载体构建相关内容。
三、终产品
1. 完整实验报告
2. 突变完成的质粒和甘油菌株
3. 完整测序报告和序列碱基图
 
 
◆载体改造
载体改造是指利用重叠延伸PCR、酶切等方法对己有载体多克隆位点(MCS) 序列、启动子、增强子、筛选标记、荧光标记等功能元件进行改造，从而增强载体的表达能力或形成具有新功能的载体。
一、服务内容
1. 提供改构成功的载体及甘油菌，提供改构后载体的测序报告；
2. 若改构位点特殊或较复杂，本公司技术部将免费为客户设计改构方案；
3. 各类载体改造，如细菌表达载体、酵母表达载体、杆状病毒表达载体、哺乳动物表达载体、报告基因载体等；
4. 若改构位点特殊或较复杂，本公司技术部将免费为客户设计改构方案。
二、收费标准
 

服务项目	内容说明	收费标准￥	实验周期
载体改造	根据客户具体要求进行改造	请询价	4-8 周

三、样品要求
1. 请提供待突变的质粒(> 1μg)或相应菌液；
2. 载体构建及改造所需的实验方案（包括序列资料、希望克隆到的载体、酶切位点等资料），目的基因产物及序列，待改造载体及相关背景资料。
3. 待突变的野生型基因或片段测序图谱一份；
4. 若无野生型的质粒或模板，也可提供基因组DNA(> 1μg)或RNA，由我们完成野生型基因或片段的构建，具体收费标准和实验周期请参考载体构建相关内容；
5.对于本公司已有的载体和模版，免费提供。
 
三、终产品
1. 完整实验报告（包括引物序列、载体图谱一份、测序结果等）
2. 含目的片段的质粒和含该质粒的甘油菌株
3. 完整测序报告和序列碱基图
 
 
◆ 3’和5’RACE (rapid-amplification of cDNA ends)
RACE是基于PCR技术基础上由已知的一段cDNA片段，通过往两端延伸扩增从而获得完整的3'端和5'端的方法。
 
一、服务内容
1. 3’和5’RACE特异性引物的设计；
2. 样品RNA的提取；
3. 序列未知基因3’和5’端片段的扩增；
4. 扩增片段的测序和比对；
5. 完整基因序列的拼接。
二、收费标准
 

服务项目	收费标准￥	实验周期
3’RACE	4500/样品	2周
5’RACE	5500/样品	3周
3’和5’RACE	8000/样品	3-4周

三、样品要求
1. 待核酸提取的样品（包括细胞，组织，植物等）
2. 核心片段序列信息和预估计的基因长度，GC含量等相关信息；
四、终产品
1. 完整实验报告 (包括具体实验步骤和实验图片等)
2. 完整基因序列的质粒和克隆载体甘油菌株
3. 完整测序报告和序列碱基图