叶绿体蛋白提取试剂盒(2D电泳用)100T售后服务
- 产地:上海市
- 供应商:上海莼试生物技术有限公司
- 供应商报价:面议
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叶绿体蛋白提取试剂盒(2D电泳用)100T售后服务实验操作步骤:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量为 1mL ,其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此类推;对于细胞悬液每50~100 万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超纯水的比例稀释JC-1 。剧烈震荡充分溶解并混匀 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液(5 ×),混匀后即为 JC-1 染色工作液。
2、阳性对照的设置:
把试剂盒中提供的CCCP(10mM )推荐按照1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至10uM ,处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常10uM CCCP处理 20 分钟后线粒体的膜电位会完全丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料决定。
3、对于悬浮细胞:
(1)取 10~60 万细胞,重悬于 0.5mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育20 分钟。
(3)在孵育期间,按照每 1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入 4mL 蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 染色缓冲液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育结束后,600g 4 ℃离心3 ~4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
(5)用JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤 2 次:加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。再加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心 3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。
(6)再用适量 JC-1 染色缓冲液(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
叶绿体蛋白提取试剂盒(2D电泳用)100T售后服务注意事项
(1)本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(4)整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作,以免影响细胞状态。
(5)在细胞洗涤的zui后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果。
(6)为防止荧光衰变,宜在1小时内进行流式检测。
(7)PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC染色,zui短可在上机前5分钟再加入PI染色。
TM4(正常小鼠Sertoli细胞) 5×106cells/瓶×2
人脐血间质干细胞 Human umbilical cord blood mesenchymal stem cells
METRN Others Mouse 小鼠 Meteorin / METRN 人细胞裂解液 (阳性对照)
MG-63细胞,人成骨肉瘤细胞 单增李斯特氏菌 表达小鼠MHCⅠ类分子Kb的人胚肾细胞;293KB
人干细胞因子单克隆抗体细胞株;AMS2(SCF3)
Hs 746T(人胃癌细胞) 5×106cells/瓶×2 COS-7L, 非洲绿猴肾成纤维细胞 腺病毒转化的人胚肾细胞;AAV-293
滋养层细胞培养基TM-prf
EPO Others Mouse 小鼠 Erythropoietin / EPO 人细胞裂解液 (阳性对照)
大鼠支气管上皮细胞完全培养基 100mL
CV-1细胞,非洲绿猴肾细胞 HPAC(人癌细胞) CM-H010人小气道上皮细胞完全培养基100mL
EGFL6 Protein Human 重组人 EGFL6 / EGF-L6 蛋白 (His 标签)
MDA-MB-468(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2 脑静脉血管平滑肌细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
HA Others H2N2 甲型流感 H2N2 (A/Guiyang/1/1957) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
人前列腺成纤维细胞裂解物HPrFL
小鼠胚胎成纤维细胞;C3H 10T1/2 2A6
tTA基因修饰的小鼠畸胎瘤细胞(B类);F9-CAG-tTA-3E5 中性蛋白酶(含100mL酶解缓冲液) 10mL
THP-1人单核白血病细胞 Human
CNTNAP2 Others Mouse 小鼠 CNTNAP2 / CASPR2 人细胞裂解液 (阳性对照)
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