明胶水溶液(2%,无菌)100ml实验方法
- 产地:上海市
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明胶水溶液(2%,无菌)100ml实验方法实验操作步骤:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量为 1mL ,其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此类推;对于细胞悬液每50~100 万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超纯水的比例稀释JC-1 。剧烈震荡充分溶解并混匀 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液(5 ×),混匀后即为 JC-1 染色工作液。
2、阳性对照的设置:
把试剂盒中提供的CCCP(10mM )推荐按照1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至10uM ,处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常10uM CCCP处理 20 分钟后线粒体的膜电位会完全丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料决定。
3、对于悬浮细胞:
(1)取 10~60 万细胞,重悬于 0.5mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育20 分钟。
(3)在孵育期间,按照每 1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入 4mL 蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 染色缓冲液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育结束后,600g 4 ℃离心3 ~4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
(5)用JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤 2 次:加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。再加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心 3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。
(6)再用适量 JC-1 染色缓冲液(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
明胶水溶液(2%,无菌)100ml实验方法注意事项
(1)本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(4)整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作,以免影响细胞状态。
(5)在细胞洗涤的zui后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果。
(6)为防止荧光衰变,宜在1小时内进行流式检测。
(7)PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC染色,zui短可在上机前5分钟再加入PI染色。
SNU-5(人胃癌细胞) 5×106cells/瓶×2
SD大鼠脂肪间质干细胞 SD rat adipose mesenchymal stem cells
IL12B Others Mouse 小鼠 IL12B / IL-12B 人细胞裂解液 (阳性对照)
BT-325细胞,人神经胶质瘤细胞 空肠弯曲菌 人胚皮肤成纤维细胞;CCC-ESF-1
人脑瘤细胞;SF126
Hep G2(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0442SK-NEP-1(人肾母细胞瘤细胞)5×106cells/瓶×2 人胚胎肌肉组织来源细胞;CCC-HSM-2
小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞;SH3
ERBB3 Others Rhesus 恒河猴 HER3 / ErbB3 人细胞裂解液 (阳性对照)
caski
Hepa1-6-EGFP(CMV-GFP慢病毒构建稳定株)小鼠肝癌细胞 Hepa1-6-EGFP (CMV-GFP lentiviral construct stable strain) of hepatocellular carcinoma cells in mice DMEM+10% FBS
TNFSF11 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 RANKL / OPGL / TNFSF11 蛋白 (Fc 标签)
人主动脉平滑肌细胞 (HASMC)( 5×105 ) HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞 Human
ERBB3 Others Rat 大鼠 HER3 / ErbB3 人细胞裂解液 (阳性对照)
人气管平滑肌细胞cDNAHTSMC cDNA
人表皮黑色素细胞完全培养基 100mL
VSMC细胞,大鼠胸主动脉平滑肌细胞 786-0(肾透明细胞腺癌) 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化);PC-12(高分化)
EFNB2 Protein Rat 重组大鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (Fc 标签)
A2(人腺样囊性癌细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠黑色素瘤细胞;B16
大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人特异性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)免疫试剂盒 Human SP1/PSβ1-G ELISA Kit
MouseKidneyinjurymolecule1,Kim-1ELISAKit小鼠肾损伤分子1(Kim-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
IL-1alpha(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克
HumanNetrin-1,Ntn1ELISA试剂盒人轴突生长诱向因子1(Ntn1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
Humanproteinphosphatase1regulatorysubunitA,PPP1R1AELISAKit人蛋白磷酸酶1调控/YZ因子亚基1A(PPP1R1A)ELISA试剂盒规格:96T/48T
兔子S100B蛋白(S-100B)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Human heme oxygenase 2 (HO-2) ELISA Kit 人血红素氧合酶2(HO-2)ELISA试剂盒
Humangranulocytespecificantinuclearantibody,GS-ANAELISAKit 人粒细胞特异性抗核抗体(GS-ANA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
Humanfattyacid-bindingprotein,FABPELISA试剂盒人脂肪酸结合蛋白(FABP)ELISA试剂盒规格:96T/48T
组织VZV(VARICELLAZOSTER)病毒定性检测试剂盒20次
HumanNuclearmatrixprotein22,NMP-22ELISAKit人核基质蛋白22(NMP-22)ELISA试剂盒规格:96T/48T
明胶水溶液(2%,无菌)100ml实验方法人EB病毒IgA(EBvIgA)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人D-乳酸(D-LAC)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人D二聚体(D2D)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人DNA结合蛋白(DBP)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
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