RAW264.7/osteoclasts differentiation 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞

须知： 富衡生物发布1. 液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？ 要冷藏！！因为液体培养基经冷冻后再经溶化时，其溶液的pH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月 ~ 一年。2.液体培养基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。 　几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20 ◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4 ◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。基础医学细胞ZX在其服务项目中配制分装了高浓度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml完全培养基中，其终浓度为2mM/ml培养基。包装为粉红色，-24◦C保存。 3. 培养用液pH对细胞生长的影响 　　由于，大多数细胞适宜pH为7.2~7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更利于细胞生长。因此，我们在配制培养用液时，可把液体的pH稍微调得偏酸一些。液体在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时，溶液的pH还会向上浮动0.2左右。4.细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？ 不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37 oC 其作用能力。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反复冲洗细胞培养瓶，以便于将含血清的培养基冲洗干净，这样就能大大提高消化液的消化能力。本ZX通常使用的消化液浓度为：（1）０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ；（2）０.２５％胰蛋白酶＋０.０３％ＥＤＴＡ。（3）0.25% 胰蛋白酶溶液ｐＨ８.０～９.０；使用Ｄ－Ｈａｎｋ液配制。多数细胞传代消化可使用０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ这种消化液。 购买上海富衡生物细胞注意事项 （富衡生物）发布 一、客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。 二、如为贴壁细胞，请在显微镜下观察细胞密度：1. 未超过80%汇合度时，用75%酒精（建议配置75%酒精的水也是灭菌超纯水，喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作；然后打开盖子，先用枪头把培养基吸出10ml左右，放在离心管里，然后瓶口过火（严禁直接倾倒），这样可以保证不污染，再用10ml的移液管，将剩余的培液全部吸出，放于离心管中，培养瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培养16hr(时间根据细胞生长情况调整）之后，传代或者冻存。2. 超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。具体步骤如下：1) 弃去培养液，用3ml PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次；2) 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于T25培养瓶中，倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将培养瓶倒转大约30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分散，轻敲几下培养培养瓶，细胞随即脱落下来；3) 加入6-8ml完全培养基，吸出，分到新的培养瓶中，按要求分瓶。 三、如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心5分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。注意：换液时一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造成生长不好。四、细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？（1）细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、破损、漏液等，重发；（2）冻存的细胞复苏后，绝大多数细胞未存活，重发；（3）存活的细胞静置24小时后，绝大多数细胞未存活，重发；（4）冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封，出现污染，重发；（5）视具体情况而定。五、细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？（1）客户造成细胞污染，不重发；（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；（3）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；（4）细胞培养时经其它处理的，不重发；（5）细胞收到2天内，未告知，不重发；（6）视具体情况而定。六、售后服务政策细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果；细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，我们调查核实后予免费调换，不收取任何费用。需要客户提供细胞培养说明、细胞操作处理方法、细胞质量问题反馈表;如果搞不清原因的，或者客户直接愿意支付购买价5.0折的费用直接复苏。如用户收到细胞8-30天之内，因处理不当造成细胞死亡或污染，我公司将以5.0折优惠价重新提供一株原细胞 质量可靠，售后有保障 ★ 我库细胞近3000种，来源于美国ATCC. 细胞都是经过严格质量控制。 冻存细胞时间为5-7个工作日，活细胞为7-15个工作日。 ★ 由于细胞库现有细胞类目多，为了不出现混乱错误，需要了解相关细胞 价格及详细资料请老师联系我们，对您造成的不便还请见谅！ ★ 注：如运输过程中导致细胞污染或者死亡，我们将无条件补发 收货后十个工作日内有其他问题提供照片可半价重发